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| 扩展青霉碱性脂肪酶cDNA的克隆和表达 | |
| 引用本文： | 邬敏辰,李江华,黄伟达,孙崇荣. 扩展青霉碱性脂肪酶cDNA的克隆和表达[J]. 复旦学报(自然科学版), 2001, 40(5): 509-515 |
| 作者姓名： | 邬敏辰 李江华 黄伟达 孙崇荣 |
| 作者单位： | 1. 复旦大学生命科学学院;江南大学医学系 2. 江南大学医学系 3. 复旦大学生命科学学院 |
| 基金项目： | 国家“九五”科技攻关资助项目（96－C03－02－01） |
| 摘 要： | 采用TRIzol试剂一步法所抽提的总RNA的D（260）／D（280）值为1.82，甲醛变性电泳呈现真核微生物所特有的28S rRNA和18S rRNA条带。根据扩展青霉所产碱性脂肪酶（Lip PE)N末端20个氨基酸残基序列和真核生物mRNA3‘端具有poly(A)等所提供的生物信息，采用RT－PCR技术和3‘－RACE法扩增了Lip PE成熟肽编码区和3‘非编码区的cDNA，直接将该PCR产物克隆至pUCm-T载体中。序列分析表明，该碱性脂肪酶含有258个氨基酸，其中保守的五肽序列为Gly-His-Ser-Leu-Gly。进一步采用Clot Tech公司的SMART^TM PCR cDNA文库构建试剂盒，扩增、克隆和测定了自转录起始点至编码区的cDNA片段，从而完成了Lip EP完整cDNA的分析测定。最后将编码完整脂肪酶蛋白的cDNA克隆至pGEX-5X-3表达载体中，在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达，SDS－PAGE检测结果表明，所表达的GST－Lip EP融合蛋白分子质量约为53ku;免疫印迹（Western Blotting)技术证明了所克隆的cDNA确为编码扩展青霉WMC20718脂肪酶的基因。 |
| 关 键 词： | 扩展青霉WMC20718 碱性脂肪酶 基因克隆 表达 氨基酸残基序列 真核生物 cDNA |
| 文章编号： | 0427-7104(2001)05-0509-07 |
Cloning and Expression of cDNA Encoding Alkaline Lipase from Penicillium expansum |
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| WU Min-chen,LI Jiang-hua,HUANG Wei-da,SUN Chong-rong. Cloning and Expression of cDNA Encoding Alkaline Lipase from Penicillium expansum[J]. Journal of Fudan University(Natural Science), 2001, 40(5): 509-515 | |
| Authors: | WU Min-chen LI Jiang-hua HUANG Wei-da SUN Chong-rong |
| Abstract: | |
| Keywords: | Penicillium expansum WMC2O718 alkaline lipase cloning expression |
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