具有溶菌酶的部分生物活性的α—乳清蛋白（^32His→Leu,^33Thr→Glu,^103Tyr→Ala）突变体

在溶菌酶催化机理以及α－乳清蛋白和溶菌酶同源比较的基础上，构建了含3个突变点的α－乳清蛋白突变体（H32L，T33E，Y103A），并将其克隆到具有T7启动子的表达质粒pET28a（＋）中，在大肠杆菌BL21（DE3）／pLys中获得高效表达，存在于包涵体中的目标蛋白经变复性并通过DEAE Sepharose Streamline和Sephacryl S200层析柱获得纯化蛋白，合成底物p-Nitrophenyl-β-D-N′，N″，N′″－Triacetyl-chitotriose pNP-(NAcGlc)3]与突变体蛋白的反应时间曲线证明突变体蛋白了部分溶菌酶生物活性，为重组难蛋清溶菌酶（HEWL）的5．26％，利用等温滴定量热法测定突变体蛋白与五糖底物chitopentaose的平均热结合能为71．34kJ/mol,重组HEWL为105．47kJ/mol，实验表明，通过有限元的几个突变就可以使α－乳清蛋白获得溶菌酶的活性，这在分子水平上有力地佐证了两者的高度同源性和进化关系。