| 基于BAC同源重组高效构建小鼠胚胎干细胞Nanog基因报告体系 |
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| 作者姓名： | 范彦 童攒 尤洁芳 杜立颖 邹方东 丁明孝 邓宏魁 |
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| 作者单位： | 生物资源与生态环境教育部重点实验室,四川大学生命科学学院,成都,610064;细胞增殖分化调控系统研究教育部重点实验室,北京大学生命科学学院,北京,100871;北京实验动物中心,北京,100871 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（批准号：30421004）资助项目.致谢 感谢LiuPentao博士惠赠pL-253质粒及DY380菌株.感谢赵扬、曲秀霞、谭磊、徐君及曾博协助修改手稿.特别感谢庆婷婷、杨炜峰一直以来提供的技术支持. |
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| 摘 要： | Nanog是最新发现的一个在胚胎干细胞(ES细胞)中特异表达, 并在保持ES细胞多能性的机制中有重要作用的转录因子. Nanog基因的表达能非常灵敏地随ES细胞的分化而下调, 使之成为指示ES细胞多能性最理想的标志基因之一. 本研究基于细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome, BAC)同源重组技术, 并改进了将报告基因敲入目的位点的重组方案, 高效构建了小鼠ES细胞(mES细胞)的Nanog/EGFP报告体系. 基因打靶后的mES细胞具有与其源mES细胞相同的特性, 并能稳定地将Nanog与EGFP (enhanced green fluorescence protein)的表达偶联. 此报告体系能通过EGFP的表达有效报告Nanog基因的表达水平, 从而对mES细胞分化或未分化状态作出明显指示. 本研究为mES细胞自我更新和分化的研究提供了一个理想的实验体系, 不仅能用于进一步优化mES细胞的培养体系, 对研究Nanog的表达调控及其与其他维持mES细胞多能性的因子和途径之间的关系也有深远的意义.
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| 关 键 词： | 小鼠胚胎干细胞 自我更新 Nanog EGFP 细菌人工染色体 同源重组 |
| 收稿时间： | 2007-03-22 |
| 修稿时间： | 2007-03-22 |
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