| 假单胞菌HS-D36偏苯三酚1,2-双加氧酶克隆表达与催化特性研究 |
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| 引用本文： | 李景龙,袁永泽,李丹丹,杨雪婷,耿 辉,熊 丽,刘德立.假单胞菌HS-D36偏苯三酚1,2-双加氧酶克隆表达与催化特性研究[J].华中师范大学学报(自然科学版),2015(5). |
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| 作者姓名： | 李景龙 袁永泽 李丹丹 杨雪婷 耿 辉 熊 丽 刘德立 |
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| 作者单位： | 华中师范大学 生命科学学院， 武汉 |
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| 摘 要： | 由pnpC编码的偏苯三酚1,2-双加氧酶(Hydroxyquinol 1,2-dioxygenase,PnpC)是微生物分解硝基芳香族类环境污染物的关键酶.本研究从对硝基苯酚(p-nitrophenol,PNP)降解菌HSD38(Pseudomonas sp.)中克隆pnpC基因,利用E.coli BL21(DE3)高效表达重组PnpC,通过亲和色谱纯化并分析其催化特性.实验结果表明:HS-D36的pnpC开放阅读框长度为873bp,编码290个氨基酸,酶蛋白相对分子量33KD;20℃、异丙基硫代-β-半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导可高效表达重组PnpC;重组酶经Ni-NTA亲和色谱一步分离可达到电泳纯;纯酶比活力9.3U/mg,纯化倍数37.2,活力收率23.8%;重组PnpC催化邻苯二酚开环反应的最适温度45℃、最适pH 5.0;Lineweaver-Burk双倒数作图表明PnpC对邻苯二酚降解的米氏常数(Km)为21.95mol/L、最大反应速度(Vmax)为2.68mol/(min·mg);Fe3+、Cu2+、Fe2+和Zn2+对该酶具激活作用,Ni 2+则显示抑制效应.
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| 关 键 词： | 对硝基苯酚 偏苯三酚1， 2-双加氧酶 表达纯化 催化特性 |
Expression,purification, and characterization of the recombinant hydroxyquinol-1, 2-dioxygenase from Pseudomonas sp.strain. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | |
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