| 草地早熟禾ISSR-PCR反应体系优化 |
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| 引用本文： | 童阿玛,王柳英. 草地早熟禾ISSR-PCR反应体系优化[J]. 青海大学学报, 2009, 27(3): 55-58 |
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| 作者姓名： | 童阿玛 王柳英 |
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| 作者单位： | 童阿玛,TONG A-ma(青海大学,青海,西宁,810016);王柳英,WANG Liu-ying(青海大学畜牧兽医科学院,青海,西宁,810003) |
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| 基金项目： | 国家科技项目，青海省科技厅攻关项目 |
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| 摘 要： | 采用正交设计和单因子试验结合的方法,优化适合于草地早熟禾的ISSR体系。对影响ISSR-PCR的多个因素,包括MgCl2、dNTP、Primer、TaqE的浓度和用量进行优化,同时,对DNA模板浓度、引物退火温度进行筛选。确定草地早熟禾的最佳ISSR-PCR反应体系为：94℃预变性5min,94℃变性30 s,Tm值退火45 s,72℃延伸90 s,35个循环,最后72℃延伸10 min,4℃保存;20μL反应体系包括2μL10×Buffer,0.96μL dNTP（2.5×10^-3mol.L^-1）,1μL Primer（1.0×10^-5mol.L^-1）,0.2μL Taq酶（5 U.μL^-1）,1μL Template DNA,14.84μL H2O。
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| 关 键 词： | 草地早熟禾 ISSR 体系优化 正交试验 |
Optimization of Poa pratensis ISSR-PCR amplification conditions |
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| TONG A-ma,WANG Liu-ying. Optimization of Poa pratensis ISSR-PCR amplification conditions[J]. Journal of Qinghai University(Natural Science), 2009, 27(3): 55-58 |
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| Authors: | TONG A-ma WANG Liu-ying |
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| Affiliation: | 1.Qinghai University;Xining 810016;China;2.Academy of Animal and Veterinary Medicine;Qinghai University;Xining 810003;China |
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| Abstract: | Using orthogonal test in combination with single - factor test method to optimize Poa pratensis ISSR - PCR amplification conditions, screening MgCl2, dNTP, Primer, TaqE concentration and dosoge, DNA template concentration, primer annealing temperature. The ISSR - PCR amplification conditions were optimized and established. PCR amplification conditions were consisted of one cycle of 94℃ for 5 min, 94℃ for 30 s,Tm annealing 45 s and 72℃ for 90 s, followed by 35 cycles, 72℃ for 10 min, and 4℃ forever. Amplification mixtures, 20 μL total, were 2 μL 10×Buffer, 0.96 μL dNTP （2.5 × 10^-3mol·L^-1）, 1 p,L Primer （1.0×10^-5 mol·L^-1）, 0.2 μL TaqE （5U. μl^-1） , 1μl Template DNA, 14.84 μl H2O. |
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| Keywords: | ISSR |
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