| 19-去甲睾酮单克隆抗体的筛选及icELISA 方法的建立 |
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| 引用本文： | 姜金庆,张海棠,范国英,马金友,王自良,王建华.19-去甲睾酮单克隆抗体的筛选及icELISA 方法的建立[J].科学通报,2011,56(20):1622-1628. |
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| 作者姓名： | 姜金庆 张海棠 范国英 马金友 王自良 王建华 |
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| 作者单位： | 河南科技学院动物科学学院;西北农林科技大学动物医学院; |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划重大项目(2006BAK02A21/1); 河南省高校科技创新人才支持计划(2010HASTIT026)资助 |
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| 摘 要： | 采用细胞融合技术筛选抗19-去甲睾酮(nortestosterone, NT)单克隆抗体(monoclonalantibody, mAb)杂交瘤细胞株, 体内诱性腹水法制备NT mAb, 建立异源性间接竞争ELISA(indirect competitive ELISA, icELISA)标准曲线, 并对其特异性、理化因素的影响和基质效应性进行探讨. 结果表明, 筛选的5 株杂交瘤细胞分泌的单抗腹水效价为0.64×105~2.56×105, 半数抑制浓度IC50 为0.55~1.0 ng/mL, 抗体为IgG1 亚型, 具k 轻链, 亲和常数Ka 为2.6×109~4.7×109 L/mol. 建立的icELISA 标准曲线在磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline, PBS)中的线性检测范围为0.004~85.8 ng/mL, IC50 值为0.55 ng/mL, 检测限(limit of detection, LOD)为0.002 ng/mL; 抗体与17a-去甲睾酮的交叉反应率(cross-reactivity, CR)为62%, 与其他化合物无CR. 标准品稀释液中甲醇的最佳含量为10%, 牛尿1:20 倍稀释可消除基质干扰, ELISA方法和液质联用检测(LC-MS/MS)的相关性良好(R2=0.9871).
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| 关 键 词： | 19-去甲睾酮 杂交瘤细胞株 单克隆抗体 间接竞争ELISA 牛尿 |
| 收稿时间： | 2010-12-13 |
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