| cnksr2基因干扰腺病毒的构建及鉴定 |
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| 作者姓名： | 梁金 沈宁 徐康 李朝军 薛斌 |
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| 作者单位： | 南京大学医学院,江苏省医学分子技术重点实验室;南京师范大学生命科学学院,江苏省分子医学生物技术重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31171306);江苏省自然科学基金(BK2011568) |
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| 摘 要： | 构建小鼠cnksr2基因干扰腺病毒质粒载体并加以鉴定.根据小鼠cnksr2基因序列设计cnksr2干扰序列引物,定向克隆至穿梭载体pshuttle-H1的BglⅡ和HindⅢ位点,PmeⅠ酶切线性化的pShuttle-H1-Sicnksr2干扰质粒,并与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共同转化E.coli BJ5183感受态细菌,产生重组腺病毒载体.用PacⅠ酶切线性化的回收质粒,转染293A细胞,包装腺病毒颗粒,在倒置显微镜下观察细胞病理性变化(Cell pathological effect,CPE),用TCID50法测定病毒颗粒的浓度,并初步观察病毒感染PC12细胞对目的基因的干扰效率.经酶切鉴定、测序证实成功构建小鼠cnksr2基因干扰腺病毒载体.包装的腺病毒浓缩悬液滴度为3.98×107PFU/mL.cnksr2在大鼠及小鼠中具有保守性,该病毒能在大鼠来源的PC12细胞中成功表达,并且对cnksr2基因干扰效率达50%以上.结论:成功构建了小鼠cnksr2基因的干扰腺病毒载体.
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| 关 键 词： | cnksr2基因 干扰 腺病毒 |
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