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| 丙型肝炎病毒5＇NCR转基因细胞模型及在反义核酸药物筛选和评价中的应用 | |
| 作者姓名： | 王小红 王升启 管伟 毛秉智 |
| 作者单位： | 军事医学科学院放射医学研究所, |
| 基金项目： | 国家"八六三”计划(编号:102-08-04-01)、军队"九五”重点课题(编号:96Z007)资助项目 |
| 摘 要： | 为了进行以基因为靶的抗丙型肝炎病毒(HCV)药物的筛选及评价,将HCV5＇NCR-C基因与荧光素酶基因的融合基因片段插入pCI-neo表达载体,通过PCR扩增、酶切反应及荧光素酶瞬间表达活性鉴定,获得HCV5＇NCR调控荧光素酶的稳定表达质粒pHCV-ne04,将其转染HepG2细胞,经GA18筛选,从150个克隆中获得一个高荧光素酶活性表达的细胞株HepG2.9706.该株细胞内HCV片段的DNA及mRNA检测均呈阳性,转基因拷贝数为140.利用该细胞株,通过脂质体介导,对3条针对HCV调控基因的反义寡核苷酸(ASODNs)即HCV363,HCV349,HCV279进行了活性评价,结果显示,三种ASODNs均具有特异性的剂量依赖性抑制活性,浓度在0.5μmol/L时,三者对HCV5＇NCR调控荧光素酶表达抑制率分别为61%,55%及48%.该研究提示反义寡核苷酸有可能成为治疗HCV的新途径. |
| 关 键 词： | 丙型肝炎病毒 反义寡核苷酸 荧光素酶 HepG2.9706细胞 |
| 修稿时间： | 2000-10-10 |
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