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| 巴马香猪CYP3A29 mRNA表达的TaqMan定量方法学建立 | |
| 引用本文： | 杨家大,商海涛,魏泓,杨婉身. 巴马香猪CYP3A29 mRNA表达的TaqMan定量方法学建立[J]. 井冈山学院学报, 2008, 29(2) |
| 作者姓名： | 杨家大 商海涛 魏泓 杨婉身 |
| 作者单位： | 1. 井冈山大学,医学院,江西,吉安,343000 2. 第三军医大学基础部,重庆,400038 3. 四川农业大学生命科学与理学院,四川,雅安,625014 |
| 基金项目： | 科技部科研项目，同济大学校科研和教改项目 |
| 摘 要： | 目的 建立巴马香猪CYP3A29 mRNA表达的TaqMan定量方法.方法 通过RT-PCR、TA克隆等技术制 备CYP3A29-pMD18-T和β-actin-pMD18-T实时荧光定量标准品,并以CYP3A29-pMD18-T标准品为模板,对不同浓度Mg2与探针组合的TaqMan反应体系进行筛选,TaqMan PCR方法,并对其有效性及重复性进行评价.结果 筛选到的TaqMan PcR方法为:PCR总体积10 μL,其中含1xBuffer、5.5 mmol/L Mg2、0.8 mmol/L dNTPmix、0.3 μmol/L上下游引物、0.2 U/μL rTaq、0.I μmol/L探针、1 μL模板.热循环条件为94℃5 min→40cycles(94℃15 s→60℃ 45 s→读板).结论 建立了有效测定巴马香猪CYP3A29 mRNA拷贝数浓度的TaqMan PCR方法.通过该方法分别定量CYP3A29和β-actin mRNA的拷贝数浓度,即可求出CYP3A29mRNA的表达水平. |
| 关 键 词： | 巴马香猪 CYP3A29 TaqMan |
Establishing quantitative TaqMan method for determining expression level of CYP3A29 mRNA in Bama miniature pig's tissues |
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| YANG Jia-da,SHANG Hai-tao,WEI Hong,YNAG Wan-shen. Establishing quantitative TaqMan method for determining expression level of CYP3A29 mRNA in Bama miniature pig's tissues[J]. Journal of Jinggangshan University, 2008, 29(2) | |
| Authors: | YANG Jia-da SHANG Hai-tao WEI Hong YNAG Wan-shen |
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