人骨髓间充质干细胞诱导分化为RPE样细胞的探讨 |
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引用本文: | 侯泽江,徐巍,郭健,徐国兴.人骨髓间充质干细胞诱导分化为RPE样细胞的探讨[J].海峡科学,2010(5). |
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作者姓名: | 侯泽江 徐巍 郭健 徐国兴 |
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作者单位: | 福建医科大学附属第一医院,福建省眼科研究所 |
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基金项目: | 1.福建省省重点科研课题(基金编号:2008Y0040).2.国家卫生部科研基金课题 |
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摘 要: | 目的:探索骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外定向分化成视网膜色素上皮(RPE)样细胞所需的微环境。方法:采用淋巴细胞分离液梯度离心法分离纯化BMSCs,第一阶段将培养第3代的细胞以bFGF、EGF及BDNF三种因子首先进行向神经前体细胞诱导分化,应用免疫细胞化学检测诱导细胞巢蛋白表达情况,当巢蛋白阳性表达率达到最高时去除诱导因子,进行第二阶段与第三代人RPE细胞共培养诱导2w,两阶段诱导后均采用免疫细胞化学及RT-PCR方法检测角蛋白及RPE65蛋白表达情况。结果:免疫细胞化学检测方面,诱导第3d开始能检测到巢蛋白表达,第12d阳性表达率达到最高,达(86.9±2.6)%,第一阶段诱导后见角蛋白表达,未见RPE65蛋白表达,第二阶段诱导后见角蛋白表达,阳性率为(60.8±3.1)%,见RPE65蛋白表达,阳性率为(25.7±3.8)%。RT-PCR检测方面,两阶段角蛋白与RPE65蛋白结果与免疫细胞化学检测结果一致。结论:体外采用分阶段诱导法,应用因子bFGF、EGF、BDNF及与RPE细胞共培养的微环境作用下能在体外诱导BMSCs表达RPE细胞标志物角蛋白以及RPE65蛋白。
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关 键 词: | 骨髓间充质干细胞 分化 视网膜色素上皮细胞 共培养 |
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