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| 人凝血因子Ⅶ在CHO/DG44细胞中的表达 | |
| 作者姓名： | 马登佼 陈金武 吴传芳 |
| 作者单位： | 四川大学生命科学学院功能基因组实验室;四川大学生命科学学院功能基因组实验室;四川大学生命科学学院功能基因组实验室 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31371325） |
| 摘 要： | PCR法扩增FⅦ基因,构建重组表达质粒FⅦ-pOptiVEC,酶切、测序鉴定.脂质体法将FⅦ-pOptiVEC质粒转入CHO/DG44细胞,并用氨甲喋呤(MTX)进行分级加压筛选,获得高表达重组FⅦ蛋白的阳性细胞克隆.亲和层析法纯化FⅦ,并通过Western-blot检测蛋白表达情况.采用FⅦ促凝活性检测试剂盒(凝固法)检测FⅦ的凝血活性.结果表明筛选出的细胞克隆能稳定表达目的蛋白,MTX加压使其表达量明显升高.促凝活性检测结果证明获得的FⅦ蛋白具有凝血活性. |
| 关 键 词： | 人凝血因子Ⅶ 真核表达 CHO/DG44细胞 凝血活性 |
| 收稿时间： | 2014-02-24 |
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