摘 要: | 以大白菜3411-7自交系为材料,使用PE公司生产的Thermal Cycler480型PCR仪,对影响大白菜RAPD扩增的因素进行了研究,确定了模板,Mg^2 ,dNTPs,引物和Taq DNA聚合酶的适宜浓度和最佳的循环次数。实验结果表明,在25μL反应体系中使用20-60mg的模板DNA,1.5-2.0mmol/L的Mg^2 ,0.15-0.25mmol/L dNTPs,0.8-1.0μmol/L随机引物,1.0-1.5U Taq DNA聚合酶,在94℃下预变性5min后执行94℃ 1min,37℃ 1min,72℃ 2min,35个循环,最后72℃再延伸5min的条件下,大白菜的RAPD扩增效果较好。
|