| 文昌鱼中一个2A肽介导的多基因表达载体构建 |
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| 引用本文： | 华俊豪,李光,王义权.文昌鱼中一个2A肽介导的多基因表达载体构建[J].厦门大学学报(自然科学版),2018(1). |
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| 作者姓名： | 华俊豪 李光 王义权 |
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| 作者单位： | 厦门大学生命科学学院细胞应激生物学国家重点实验室; |
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| 摘 要： | 2A肽(P2A)介导的多基因表达载体具有高裂解活性且上、下游基因等摩尔表达等优点,已广泛应用于动物转基因研究.文昌鱼(amphioxus)作为一种新兴的模式动物,尚无应用这种表达载体的报道,为此在pXT7转录系统基础上构建一个P2A介导的多基因表达载体.将体外转录的P2A介导的mRNA注入文昌鱼卵细胞并受精后,经激光共聚焦显微镜和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测表明,该mRNA在文昌鱼胚胎中能够高效地翻译和剪切,并且在信号肽的作用下eGFP蛋白定位于细胞核中,而mCherry蛋白定位于细胞膜上,上、下游蛋白间的剪切效率达到91%;进而构建了由文昌鱼热激蛋白基因启动子(BbHsp70)启动,并由P2A介导的多基因表达载体,实验证明其在热诱导和上、下游蛋白剪切方面均达到了预期效果.
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