一种筛选高产(+/-)-γ-内酰胺酶菌株方法的建立

(+)-γ-内酰胺酶能够拆分(+/-)-γ-内酰胺得到(-)-γ-内酰胺,(-)-γ-内酰胺酶能够拆分(+/-)-γ-内酰胺得到(+)-γ-内酰胺。目前只有几种具有(+/-)-γ-内酰胺酶的微生物被报道,都是用N-乙酰-L-苯丙氨酸做为唯一碳源从土壤里筛选能利用N-乙酰-L-苯丙氨酸的菌株,它们有可能具有(+/-)-γ-内酰胺酶,再用手性高效液相色谱分析法复筛。但是这种筛选方法有点盲目性,工作量大。本实验在此基础上,先利用经典的复制平板和茚三酮染色技术,再用氨基酸显色法复筛得到3株阳性菌株,最后用手性高效液相色谱分析法确认。结果筛选到的3号菌株具有(+)-γ-内酰胺酶功能,ee值达到100%,22号和29号菌株具有(-)-γ-内酰胺酶功能,ee值达到50%。此种筛选方法的建立,以后也可用于类似的易溶,又不显色底物的降解菌株和阳性克隆子的筛选。