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| β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及表达 | |
| 作者姓名： | 郭成栓 崔堂兵 郭勇 |
| 作者单位： | 华南理工大学,生物科学与工程学院,广东广州,510006 |
| 基金项目： | 广东省工业科技攻关项目 |
| 摘 要： | 从一株产碱性纤维素酶的短小芽孢杆菌菌株H9中,克隆到了编码葡聚糖内切酶的基因,对其基因序列及酶的结构域进行了分析预测,同时将该酶的基因构建于大肠杆菌表达载体pET20b中,获得重组表达载体pET20b-EglA,转化至大肠杆菌菌株BL21（DE3）中进行表达,并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测.实验结果表明：该基因大小为1980bp,共编码659个氨基酸,在大肠杆菌中得到了良好的分泌表达;该酶的相对分子质量约为73000,由两个不连续的结构域组成,其一为N-端催化结构域,由糖基水解酶家族9组成,其二为C-端底物结合结构域,由碳水化合物绑定结构域家族3组成,其在不同温度和pH值下的活力和稳定性与原始菌株的比较接近. |
| 关 键 词： | 葡聚糖内切酶 大肠杆菌 短小芽孢杆菌 基因 克隆 表达 |
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