| 用聚合酶链式反应扩增抗冻肽基因并在双元表达载体中克隆 |
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| 引用本文： | 达来,刘小强.用聚合酶链式反应扩增抗冻肽基因并在双元表达载体中克隆[J].内蒙古大学学报(自然科学版),1995,26(4):466-472. |
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| 作者姓名： | 达来 刘小强 |
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| 作者单位： | 内蒙古大学生物学系 |
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| 基金项目： | 国家自然科学生物高技术资助 |
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| 摘 要： | 抗冻肽基因导入植物的第一步合成了５＇－末端分别带有限制性酶ｘｂａＩ和ＫｐｎＩ识别位点的一对引物，以美洲拟鲽抗冻肽的ｃＤＮＡ克隆为模板，用锚定聚合酰酶链反应扩增了抗冻肽基因，并克隆到细菌表达载体ｐＧＥＭ３２ｆ（一）和植物表达盒式载体ｐＧＡ６４３中，以限制性酶切分析和菌落杂交技术证明了转化子质粒ＤＮＡ中的含有抗冻肽基因，又用ＰＣＲ方法扩增了转化子的抗冻肽基因，从而证实了克隆成功。
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| 关 键 词： | 抗冻肽 聚合酶链反应 无性系 基因载体 扩增 |
Amplification of an Antifreeze Peptide Gene by PCR and Its Cloning in the Binary Expression Vectors Erden Dalai |
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| Wu Liu Xiaoqiang Kan Rui Liu Shunxian.Amplification of an Antifreeze Peptide Gene by PCR and Its Cloning in the Binary Expression Vectors Erden Dalai[J].Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Neimongol,1995,26(4):466-472. |
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| Authors: | Wu Liu Xiaoqiang Kan Rui Liu Shunxian |
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| Abstract: | n order to intrduce a gene for antifreeze peptide(AFP)under appropriate regulary controlinto the plant tissues,a XbaI/KpnI fragment containing AFP-coding gene is amplified by PCRfrom pCT5,a cDNA clone of winter flounder antifreeze peptide in PBR322,and subcloned intobacterial expression vector pGEM-3Zf( )and plant expression cassette of pGA643.These sub-clones are confirmed by the restriction enzyme digestion analysis and the colony hybridizationtechnique. |
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| Keywords: | antifreeze peptide PCR colony hybridization clone |
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