| 骨髓间充质干细胞的培养及其体外标记跟踪的实验研究 |
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| 引用本文： | 成忠阳,雷栓虎,董晓丽,郭丽,黄良增,岳海原,张成俊,郝俊龙,汪玉良,夏亚一,张海鸿,付廷军,刘京升.骨髓间充质干细胞的培养及其体外标记跟踪的实验研究[J].世界科技研究与发展,2015(2):155-162,167. |
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| 作者姓名： | 成忠阳 雷栓虎 董晓丽 郭丽 黄良增 岳海原 张成俊 郝俊龙 汪玉良 夏亚一 张海鸿 付廷军 刘京升 |
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| 作者单位： | 甘肃省康泰医院;兰州大学第二医院骨科/甘肃省骨关节疾病重点实验室;甘肃中医学院生理教研室;甘肃省妇幼保健医院儿科 |
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| 基金项目： | 甘肃省自然科学研究基金计划(1308RJZA239);陇原青年创新人才扶持计划资助 |
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| 摘 要： | 目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的体外分离培养;观察Brdu、DAPI以及Hoechst33342体外染色的合适时间和最佳剂量,比较三种方法的优缺点。方法 BMSCs取自SD雄性大鼠的股骨和胫骨,然后采用贴壁分离培养法对BMSCs进行分离培养,当BMSCs培养至第三代时,采用流式细胞仪对其表面抗原CD34、CD44、CD45进行测定;同时分别用Brdu、DAPI以及Hoechst33342对BMSCs进行染色标记,Brdu标记效果用免疫细胞化学方法检测,DAPI和Hoechst33342的标记率用荧光显微镜观测,最后用MTT检测BMSCs的细胞增值率,观察三种不同方法体外染色的合适时间和最佳剂量,同时比较其优缺点。结果流式细胞仪检测发现BMSCs表达CD44阳性,CD34和CD45阴性;BMSCs染色前后其表面标志表达无明显统计学差异(P0.05);Brdu染色标记BMSCs的最佳浓度和时间是10μmol/L、48小时;DAPI染色标记BMSCs的最佳浓度和时间是20μg/ml、30分钟;Hoechst33342染色标记BMSCs的最佳浓度和时间是5μg/ml、1小时。结论采用粘附贴壁分离培养法能够有效获取高纯度的BMSCs;运用Brdu、DAPI以及Hoechst33342三种方法标记BMSCs效果良好,方法可靠、合理,为研究BMSCs体内追踪打下了基础。
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| 关 键 词： | 流式细胞仪 表面标志物 细胞分离 细胞染色 骨髓间充质干细胞 |
Biological Characteristics and Optimized Tracing of Rat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell Cultured in Vitro |
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| CHENG Zhongyang;LEI Shuanhu;DONG Xiaoli;Guo Li;HUANG Liangzeng;YUE Haiyuan;ZHANG Chengjun;HAO Junlong;WANG Yuliang;XIA Yayi;ZHANG Haihong;FU Tingjun;LIU Jingsheng.Biological Characteristics and Optimized Tracing of Rat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell Cultured in Vitro[J].World Sci-tech R & D,2015(2):155-162,167. |
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| Authors: | CHENG Zhongyang;LEI Shuanhu;DONG Xiaoli;Guo Li;HUANG Liangzeng;YUE Haiyuan;ZHANG Chengjun;HAO Junlong;WANG Yuliang;XIA Yayi;ZHANG Haihong;FU Tingjun;LIU Jingsheng |
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| Institution: | CHENG Zhongyang;LEI Shuanhu;DONG Xiaoli;Guo Li;HUANG Liangzeng;YUE Haiyuan;ZHANG Chengjun;HAO Junlong;WANG Yuliang;XIA Yayi;ZHANG Haihong;FU Tingjun;LIU Jingsheng;Department of Orthopedics,Kangtai Hospital of Gansu Province;Department of Orthopedics,Second Hospital of Lanzhou University / Orthopedics Key Laboratory of Gansu Province;Gansu College of Traditional Chinese Medicine;Department of Digestion,Maternal and Child Health Care Hospital of Gansu Province; |
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