| 嗜根考克氏菌翻译延伸因子P基因的克隆、表达及其条件优化 |
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| 作者姓名： | 杨娇娇 龙中儿 黄运红 |
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| 作者单位： | 江西师范大学生命科学学院,江西 南昌,330022;江西师范大学生命科学学院,江西 南昌,330022;江西师范大学生命科学学院,江西 南昌,330022 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;江西省重点研发计划;江西省教育厅科学技术研究项目 |
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| 摘 要： | 为获得大量可溶性重组蛋白EF-P用以构建以EF-P蛋白为靶标的新型、高效抗细菌抗生素筛选模型,研究嗜根考克氏菌DC2201 efp基因的体外克隆、表达及表达条件的优化.首先对efp基因进行生物信息学分析,随后经PCR特异性扩增获得efp基因并将其插入表达质粒pET-29a(+)中,重组质粒(pET-29a(+)-efp)转化至表达宿主菌株E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,通过优化诱导表达条件(起始菌体浓度、温度、IPTG终浓度、时间)获得大量可溶性目的蛋白,最后对表达产物进行镍离子亲和层析柱纯化及SDS-PAGE、MALDI-TOF-TOF鉴定.结果获得相对分子质量大小约为25 kDa的蛋白条带,与预测的目的重组蛋白相对分子量大小相符.选择O_(D600 nm)
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| 关 键 词： | 翻译延伸因子P 基因克隆 表达 条件优化 |
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