重组人碱性成纤维细胞生长因子的纯化及生物活性鉴定

目的 :探讨重组人碱性成纤维细胞生长因子 (rhbFGF)的纯化工艺和活性鉴定 .方法 :将rhbFGF工程菌大量扩增后通过包涵体提取、复性、阳离子交换、凝胶过滤等技术进行纯化 .结果 :纯化后的rhbFGF ,相对分子质量为 17× 10 3,蛋白纯度为 95 %以上 ,比活为 1 7× 10 6 U/mg ,对NIH3T3细胞具有明显的促分裂活性 .结论 :通过复性和两步层析的纯化方法可获得高纯度、高回收率和高生物活性的rhbFGF ,可用于实验室研究及临床试验     

3T3成纤维细胞和巨噬细胞在含rhbFGF培养基血纤维上的共培养

目的：了解３Ｔ３成纤维细胞和巨噬细胞在含重组人碱性成纤维细胞生长因子（ｒｈｂＦＧＦ）培养基血纤维上的生长行为。方法：采用四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色法、相差显微镜观察、吉姆萨染色和扫描电子显微镜观察方法,结果：在低血清含ｒｈｂＦＧＦ的培养条件,３Ｔ３成纤维细胞和巨噬细胞在血纤维上能够良好生长。结论本研究揭示,血纤维不仅可以作为一种低免疫原性或无抗原性的生物支持材料用于三维组织培养,而且也可作为ｒｈ     

重组人碱性成纤维细胞生长因子类似物在大肠杆菌中的分泌表达研究

用带有大肠杆菌外膜蛋白信号肽序列的重组分泌型表达载体pSE-hbFGF，在大肠杆菌BL21中分泌表达了rhbFGF类似物。SDS－PAGE、免疫印迹结果表明，表达产物分泌到了细胞周质和培养液中，用间接ELISA测定出培养上清中的rhbFGF类似物为24.5mg/L，周质中为36.5mg/L菌液（O.D600nm=10)。同时探讨了发酵培养中影响rhbFGF表达的几个关键因素，如诱导时期的选择、诱导时间的长短、培养基的选择及诱导剂的浓度等。