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1.
The nuclear capsid protein gene (vp39) ofBombyx mori nuclear polyhedrosis virus (BmNPV) was amplified successfully by PCR technique and inserted into pGEM 3zf(+). The 5′ and
3′ terminal area of the amplified vp39 gene were sequenced with silver-staining dideoxy method. Bmvp39 gene was sub-cloned
into the expression vector pRSET-A, and transformed intoE. coli BL21. This gene was highly expressed by IPTG induction. SDS-PAGE analysis showed that the expressed protein is about 38 kd,
and the expressed amount reached maxium in 4 h with IPTG induction.
Supported by the National Natural science Foundation of China and the Doctoral Foundation of Edn carto Committee
Liu Deli: born in 1954, Doctoral Candidate from Huazhong Normal University To whom correspondence should be addressed: (027-7882712-2938) 相似文献
2.
钟劲 《北京大学学报(自然科学版)》1998,34(4):549-553
有限稀释法筛选重组AcNPV病毒钟劲胡美浩1)(北京大学生命科学学院,北京,100871)关键词重组病毒;梯度稀释;筛选;测活中图分类号Q3320引言昆虫杆状病毒表达系统是一高效表达外源基因的表达系统。用于基因工程表达外源基因的AcNPV(autog... 相似文献
3.
建立缺陷型重组腺病毒载体介导的胸苷激酶基因治疗系统(Adtk/ACV),进行离休和活体治疗大鼠C6脑胶质瘤研究.将质粒pAdtk与pJM17共转染腺病毒包装细胞──293细胞,同源重组后制备纯化的Adtk并以PCR证实;Adtk对离休C6细胞的杀伤作用随着Adtk滴度和ACV剂量增加而增强,并有旁观者效应,而未转染C6细胞和AdLacZ转染C6细胞均未被杀伤;扫描电镜下见Adtk/ACV处理的细胞呈明显病理改变;ACV可有效杀伤Adtk/C6细胞.在大鼠脑立体定向仪引导下于右额叶接种2×106个C6细胞,分别于第3,6,8和10天原位注射Adtk,同时腹腔注射ACV(100mg/(kg·d-1)),3d组、6d组、8d组大鼠成活期在90d以上,组织学检查未发现肿瘤细胞.10d组成活期(28.5±4.6)d,而C6未治疗组和AdLacZ/ACV治疗组成活期分别为(1.8±3.1)d和(14.0±2.2)d.本文建立的Adtk/ACV在离体和活体水平对大鼠C6脑胶质瘤有强烈的杀伤作用,效果确实,应用方便,ACV价格便宜,有潜在临床应用价值. 相似文献
4.
人亲环素A单克隆抗体的制备及鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
制备人亲环素A特异性单克隆抗体并鉴定其特性。方法:利用基因重组技术大量表达人亲环素A蛋白,纯化后作为抗原免疫的BABL/c小鼠,经细胞融合和筛选,制备特异单克隆抗体。结果和结论;共建立三株稳定分泌抗人CyPA的杂交瘤细胞株,其所产生的单克隆抗体均为IgM型,轻链为k。 相似文献
5.
重组肠激酶在甲醇酵母中高效表达的培养条件研究 总被引:1,自引:0,他引:1
对重组肠激酶在甲醇酵母中高效表达的发酵条件进行了优化,并在BiofloⅢ发酵罐中实现了高密度培养和高效表达。结果表明;温度30C,培养基pH6.0,当酵母密度达到200A600mm以上时,加入无水甲醇,控制甲醇的流加体积,使其终体积分数为1.0%~3.O%,继续诱导培养72h左右,酵母菌密度可达到150g/L,重组肠激酶总活性可达58kIU/L发酵液。 相似文献
6.
重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽在毕赤酵母中的表达 总被引:2,自引:1,他引:2
目的:在巴期德毕赤酵母中表达人巨细胞病毒gp52C末端和pp150C末端串联片段的嵌合肽,方法:用SacI和BglⅡ分别酶切CMVp-pPIC9K重组质粒,电打孔法导入毕赤酵母GS115后,在缺组氨酸的MD板上筛选出转化子,然后根据甲醇利用快速型(Mut^ )和甲醇利用缓慢型(Mut^s)菌株的不同生长特点,筛选出Mut^ 和Mut^s型转化子,用PCR法进一步鉴定阳性克隆,分别用甲醇诱导Mut^ 和Mut^s型转化子表达目的蛋白4d,取培养产物冻干浓缩,进行SDS-PAGE和Western blotting,筛选出能特异表达目的的蛋白的菌株,分析蛋白的含量及纯度。结果:重组人巨细胞病毒可在甲醇利用快速型毕赤酵母中有效表达,其表达量约占培养上清分泌蛋白的76.5%,结论:重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽可在真核细胞毕赤酵母中成功表达。 相似文献
7.
重组人酸性成纤维细胞生长因子促进大鼠烫伤愈合的研究 总被引:8,自引:1,他引:8
目的:研究重组人酸性成纤维细胞生长因子(rh-aFGF)促进大鼠烫伤创面愈合的作用。方法:采用大鼠背部深II度烫伤模型,将3种不同浓度的rh-aFGF溶液隔日一次滴注于创面,观察伤后不同时间的创面面积变化和病理组织学改变。结果:rh-aFGF可明显加速大鼠皮肤创伤的愈合,使创面面积明显缩小(P<0 05)。病理组织学检查发现,rh-aFGF组创面伤后7d成纤维细胞生长活跃、数量多,其毛细血管胚芽与成纤维细胞数量显著多于溶媒对照组;伤后14d,创面收缩与再上皮化明显,新生上皮向创面中心爬行较快。结论:外用rh-aFGF对大鼠深II度烫伤创面有明显的促愈合作用。 相似文献
8.
对三点自交法构建分子标记连锁图谱进行了改进,使分子标记连锁图谱构建更加精确,并结合F2群体的有关数据进行了模拟计算,证实该方法的可行性,结果表明改进的方法比原有方法更加有效。 相似文献
9.
应用实验生物学和计算生物学方法对重组人源抗HBsAg单链抗体(HBscFv)的部分理化性质和空间结构进行分析.首先应用蛋白质分析软件包Antheprot预测HBscFv等电点,然后等电聚焦测定HBscFv等电点,在此基础上,用神经网络法预测HBscFv二级结构,然后用同源建模的方法,获得HBscFv三级结构.结果发现,HBscFv等电点理论值为8.51,实验值为7.3~8.1;PHDsec结果表明,HBscFv是一种全β蛋白质;三级结构建模表明,HBscFv的VH结构域由9个片层组成,VL结构域由8个片层组成;由于单链抗体的特殊性,三级结构建模无法给出VH与VL结构域之间进一步折叠后形成的结构。 相似文献
10.
将活化癌基因T24-ras的全cDNA序列正向插入真核载体pMAMneo,构建成重组质粒pMAMneo-T24-ras.将该质粒转染NIH3T3细胞,通过药物筛选,建成细胞系3T3(T24).Southern杂交证明外源T24-ras基因已整合于受体细胞染色体中.3T3(T24)细胞表现出形态学方面的明显变化:具失去接触抑制能力,且在裸鼠体内致瘤等恶性行为.本文构建的T24-ras基因真核表达重组体和建立的转化细胞系可用于肿瘤的诊断、预防、治疗及抗肿瘤药物的筛选、评估等研究. 相似文献