发酵液中丙酮酸的HPLC法检测的研究

对高效液相色谱(HPLC)法定性定量测定发酵液中丙酮酸含量进行了研究,确定了最佳操作条件:SCR 101H色谱柱、柱温20℃、高氯酸水溶液为流动相、流速0.8mL/min、pH3.8。通过测定回收率、重现性等项指标及与酶法测定结果的比较,证明此方法对发酵液中丙酮酸的检测具有准确、快速等特点,适于发酵液中丙酮酸的检测。     

Pyruvate dehydrogenase kinase regulatory mechanisms and inhibition in treating diabetes, heart ischemia, and cancer

The fraction of pyruvate dehydrogenase complex (PDC) in the active form is reduced by the activities of dedicated PD kinase isozymes (PDK1, PDK2, PDK3 and PDK4). Via binding to the inner lipoyl domain (L2) of the dihydrolipoyl acetyltransferase (E2 60mer), PDK rapidly access their E2-bound PD substrate. The E2-enhanced activity of the widely distributed PDK2 is limited by dissociation of ADP from its C-terminal catalytic domain, and this is further slowed by pyruvate binding to the N-terminal regulatory (R) domain. Via the reverse of the PDC reaction, NADH and acetyl-CoA reductively acetylate lipoyl group of L2, which binds to the R domain and stimulates PDK2 activity by speeding up ADP dissociation. Activation of PDC by synthetic PDK inhibitors binding at the pyruvate or lipoyl binding sites decreased damage during heart ischemia and lowered blood glucose in insulin-resistant animals. PDC activation also triggers apoptosis in cancer cells that selectively convert glucose to lactate. Received 25 August 2006; received after revision 20 November 2006; accepted 20 December 2006     

补充丙酮酸盐对运动能力的影响

用文献资料法、对比法、逻辑分析法等研究了补充丙酮酸盐对身体一般功能和运动能力的影响.结果表明:丙酮酸盐补充可以降低体重和增加利用脂肪供能;有关丙酮酸盐补充对身体其他机能的影响也有报道,但仅有一些初步的证据证明它在运动员中使用的有效性;丙酮酸盐补充对人体影响的机制和有效性还有争议,推荐运动员使用丙酮酸盐的剂量还不明确.     

丙酮酸(盐)的液体发酵及其产物提取工艺优化的研究

采用TTC-CaCO3复合平板法筛选丙酮酸(盐)高产菌株,并采用正交实验优化丙酮酸(盐)的液体发酵条件及其产物提取工艺,结果表明:丙酮酸(盐)液体发酵培养的最优维生素组合为盐酸硫胺素0.015 mg/L,烟酸9 mg/L,生物素0.020 mg/L,盐酸吡哆醇0.35 mg/L;最优提取条件组合为:萃取剂种类为磷酸三正丁酯,发酵液与萃取液体积比为1:2,提取温度为20℃,其中萃取剂种类、发酵液与萃取液体积比对提取率的影响显著(P<0.05)丙酮酸(盐)发酵产物浓度及提取率均基本达到国内研究水平。     

溶氧对丙酮酸发酵的影响

采用实验室选育的高产丙酮酸菌株TorulopsisglabrataTPl9,在3种供氧方式下,研究了5L发酵罐上的丙酮酸发酵过程,比较了3种供氧方式下丙酮酸发酵、菌体生长、葡萄糖消耗和副产物的生成。发酵48h丙酮酸最高产量为65.1g·L-1;转化率为58.6%,生产强度为1.35g·L-1·h-1。     

缩酮丙酮酸转移酶基因在野油菜黄单胞菌中的表达

将野油菜黄单胞菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）ＮＲＲＬ－Ｂ－１４５９菌株的缩酮丙酮酸转移酶基因,在ｐＲＫ２０７３辅助质粒的协助下,经三亲本接合法,导入野油菜黄单胞菌ＮＫ０１小菌落的抗性突变株（ＮＫ０１·Ｓ·１）中,测定各接合子的产胶率、黄原胶粘度及丙酮酸含量,得到一系列优于原始菌株的接合子,其中四株的产胶率、丙酮酸含量及黄原胶粘度分别较出发菌株提高７．２８～１０．６０％、４０．２４～４１．４２％和１０．７９～２２．３０％．     

Torulopsis glabrata 620在丙酮酸生物合成中的能荷变化和氧化-还原态趋势

建立了用高效液相色谱法同时测定丙酮酸产生菌Toru lop sis g labrata 620中的ATP、ADP、AM P、NAD 和NADH的方法,从而描绘了在整个发酵过程中菌体的能荷变化和氧化-还原态趋势,指出菌体的能荷水平和丙酮酸生物合成密切相关,在菌体的能荷水平降低至0.1时丙酮酸开始大量合成,直至发酵末期能荷水平又重新升高。这为进一步提高丙酮酸的产量、研究Toru lop-sis g labrata中物质与能量代谢的关系奠定了基础。     

原核表达载体pHsaE1αβ的构建和人丙酮酸脱氢酶的表达与纯化

以质粒pQE9为原型载体, 将编码hPDH的α和β亚基的cDNA串联克隆到该载体上, 成功地构建了hPDH基因的表达载体pHsaE1αβ. 并在大肠杆菌中表达了hPDH, 通过 亲和层析法进行纯化, 对一些生物化学性质进行表征.     

一种基因工程菌代谢丙酮酸能力的检测方法

建立一种快捷的检测基因工程菌代谢丙酮酸能力的方法,对于开展与丙酮酸相关的代谢流研究至关重要.本研究基于丙酮酸与2,4-二硝基苯肼发生羰基化反应的原理,建立了优化的丙酮酸检测体系;研究了葡萄糖等18种代谢相关物质对所建检测体系的影响;成功地将之推广到对发酵产物体系的检测中;利用含有丙酮酸甲酸裂解酶基因的大肠杆菌BL21工程菌发酵以丙酮酸为唯一碳源的培养基,结果进一步验证了该检测方法切实可行.