HEp-2细胞MPM-2磷蛋白的蛋白质组学分析

MPM-2磷蛋白家族成员在有丝分裂进程中起着重要作用．为了从MPM-2磷蛋白家族层面入手研究细胞周期调控中磷蛋白的重要作用，以人上皮样喉癌细胞株HEp-2为细胞模型，运用双向电泳、免疫印迹以及质谱技术等蛋白质组学的方法对其细胞抽提物中的部分MPM-2磷蛋白进行了分析鉴定，初步确定了乙二醛酶(GlyoxalaseⅠ)、真核翻译起始因子(eIF4B)以及核质蛋白NPM等MPM-2特异识别的细胞磷蛋白，这将有助于进一步研究MPM2磷蛋白家族成员在细胞周期调控中的重要作用．     

Loss of antibody production accompanied by chromosome loss in a cloned hybrid line secreting antibodies to sheep red blood cells

Summary Somatic cell hybrids between Sp2/O-Ag14 mouse myeloma cells and lymphocytes derived from BALB/c mice hyperimmunized with sheep red blood cells (SRBC) were produced. One hybrid producing IgG₁ antibody to SRBC was selected, cloned twice and subsequently transferred to BALB/c mice. After a number of transfers it was found that the antibody titer in ascitec fluid gradually decreased. Cytogenetic analysis revealed gradual chromosome loss in the hybrid clone, which produced progressively less antibody.     

抗人绒毛膜促性腺激素（HCG）单克隆抗体的研制和特性分析

以HCG为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠Sp2/0—Ag14骨髓瘤细胞融合,经反复筛选和再克隆化,获得8株能稳定分泌抗HCG特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中6个高效价单抗进行了特异性和抗原决定簇检测,选出两个抗相距较远不同决定簇的单抗(2D_4,4F_4)作进一步特性分析。结果显示:免疫球蛋白亚类鉴定,2D_4为IgGl亚类,4F_4为IgG2a亚类;亲和力常数(K_(affi)),2D_4为5.41±0.94×10~(-10)mol/L,4F_4为1.37±0.33×10~(-9)mol/L。证实该两种单克隆抗体可用于研制有关临床诊断试剂盒。     

Studies of a key protein in the mechanism of the excitation-contraction coupling process of frog skeletal muscle,using phenylglyoxal

The excitation-contraction (E-C) coupling process in single twitch fibres from frog toe muscle was inhibited selectively by phenylglyoxal (PGO), a specific guanidyl modifying reagent. A new protein (31.5 kDa), which has PGO-binding ability and seems to play a key role in the E-C coupling process, was solubilized from transverse tubule membrane-junctional sarcoplasmic reticulum complexes (TTM-JSR) of frog skeletal muscles, using¹⁴C-PGO. The monoclonal antibody against this protein applied extracellularly inhibited the E-C coupling process of the single fibres. This protein appears to constitute the very first step of input for E-C coupling. It is considered to behave as an indispensable part of an electrometer to measure membrane potentials. Therefore, the name electrometrin is suggested for the new protein.     

车间流程的免疫调度算法

为了高效地解决车间流程(Flow Shop)问题,提出了一种利用免疫算法求解Flow Shop调度问题的方法.该算法是根据人或者其他高等动物的免疫系统机理设计的,将调度目标和约束条件作为抗原,将问题的解作为抗体,对抗体采用按工件加工顺序进行自然数编码,并把最大流程时间的倒数作为适应度函数,新抗体的繁殖是通过部分匹配交叉算子和按工件顺序互换的变异算子实现的,对抗体产生的刺激和抑制通过抗体浓度来调节,而抗体浓度通过计算抗体之间的最大亲和力获得.通过对Flow Shop问题的基准测试表明,该算法不仅在求解问题的规模上具有很好的可伸缩性,而且在运算时间上也低于遗传算法和模拟退火算法.     

噬菌体筛选技术筛选与联萘酚(BINOL)相结合的抗体

利用噬菌体展示技术筛选只结合1种对应体的BINOL抗体,建立人类单链抗体(scFv)噬菌体文库--Griffin.1文库,以固相化抗原淘筛抗体库,ELISA鉴定噬菌体抗体.从经过4轮富集的次级抗体库中挑选到噬菌体克隆,用该克隆制备的单链抗体阳性克隆,经ELISA证实具有良好的抗原特异性.从人类scFv噬菌体文库中获得抗BINOL的特异性抗体.     

人亲环素A单克隆抗体的制备及鉴定

制备人亲环素Ａ特异性单克隆抗体并鉴定其特性。方法：利用基因重组技术大量表达人亲环素Ａ蛋白,纯化后作为抗原免疫的ＢＡＢＬ／ｃ小鼠,经细胞融合和筛选,制备特异单克隆抗体。结果和结论;共建立三株稳定分泌抗人ＣｙＰＡ的杂交瘤细胞株,其所产生的单克隆抗体均为ＩｇＭ型,轻链为ｋ。     

抗人Connexin31单克隆抗体的获得与应用

间隙连接蛋白31(Connexin31,Cx31)是间隙连接蛋白(Connexin)家族的一员,目前对于Cx31的功能及其调节方式知之甚少。本实验利用多肽合成的方法合成Cx31羧基端一个多肽片段(250-266AA),经HPLC纯化后偶联到匙孔槭血蓝蛋白,免疫Balb/c小鼠、采血检测产生阳性抗体、脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合、筛选阳性克隆建株、分泌的抗体经Westernblotting、细胞免疫荧光染色证实得到的抗体为抗间隙连接蛋白31的特异抗体。     

4种促性腺激素释放激素抗体的制备、鉴定和纯化

用3-马来酰亚胺基苯甲酸琥珀酰亚胺酯(MBS)法将人工合成的4种不同来源的促性腺激素释放激(GnRH)(即章鱼GnRH、海鞘GnRH-Ⅰ、七鳃鳗GnRH-Ⅰ和七鳃鳗GnRH-Ⅲ)分别与匙孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联后作为抗原,免疫新西兰大白兔获得GnRH抗体.用间接ELISA方法检测抗血清效价,并用Western blot鉴定其特异性.制备抗原肽亲和纯化柱,纯化多克隆抗体.结果显示,4种多克隆抗体效价高达1∶500 000(体积比),并能和相应的GnRH多肽特异性结合,纯化后的抗体在SDS-PAGE显示为单一条带.通过上述方法,获得4种高效价、高纯度的GnRH抗体,为低等动物GnRH的研究提供了理论依据.