柚皮的酶法脱苦及其果脯的研制

探讨了柚皮的酶法脱苦和柚皮果脯生产的硬化和糖制工艺。结果表明:1、采用质量分数0.3%柚皮苷酶于温度60℃、p H 4.0对柚皮脱苦60 min,柚皮的脱苦率为79.5%;2、以脱苦的柚皮为原料,用质量分数0.3%氯化钙溶液浸泡柚皮1 h,柚皮硬化效果较好;3、五种糖制方法中,采用真空渗糖法工艺较好,制成的柚皮果脯块形完整、颜色淡黄、透明饱满、柚香浓郁、酸甜适口。     

不同材料固定化柚苷酶的比较

选取壳聚糖、海藻酸钠、活性炭和氧化石墨烯对柚苷酶进行固定化,比较不同材料对柚苷酶的载酶率和固定化酶活,得到较佳的固定化材料为氧化石墨烯,其载酶率达85.61％,酶活达410.50 U/g,重复使用7次后仍能保持72.38％的相对酶活.同时研究了不同条件对氧化石墨烯固定化柚苷酶催化活性影响,得到较佳的固定条件:载酶量为每克氧化石墨烯材料承载60 mg柚苷酶,固定化温度为20℃,pH值为4.0,固定化吸附时间为9h,优化后氧化石墨烯固定化柚苷酶的酶活为433.70 U/g,重复使用7次后仍保留78.62％的酶活.     

高产柚苷酶菌株的筛选研究

以桔皮粉为诱导底物,采用富集培养的方式从堆积腐烂桔皮的泥土中筛选出一株高产柚苷酶(Naring-inase)的生产菌株WP-108.其摇瓶发酵培养测定其酶活力达910.1 U/mL,同时其继代培养稳定性良好.通过对菌株的培养特征,形态特征的观察,初步鉴定该菌株为黑曲霉(Aspergillus niger).     

从发酵液中直接提取柚苷酶

用双水相萃取方法直接从发酵液中提取柚苷酶进行了实验,就聚乙二醇-硫酸铵双水相系统中的聚乙二醇相对分子量、聚乙二醇浓度、硫酸铵浓度、无机盐的添加等因素对柚苷酶的分配行为的影响进行了探索。结果显示:在用浓度为14%~16%的PEG1000与浓度为14%~18%硫酸铵和0.1%氯化钠组成的双水相体系中,柚苷酶的分配系数达1.85以上,酶活力回收率达80%,提纯倍数为2.1。     

利用柚皮高效发酵生产柚苷酶的研究

以棘孢曲霉为菌种,以磷酸氢二铵为氮源固态发酵柚皮生产柚苷酶,结果表明,在以柚皮为碳源和磷酸氢二铵为氮源的发酵体系中,添加疏松剂和豆饼粉对柚苷酶发酵没有显著影响,而磷酸氢二铵添加量和水分质量分数对柚苷酶合成具有显著影响.当无水柚皮粉中磷酸氢二铵和水分质量分数分别为32.4%和170.0%时,有利于提高柚苷酶发酵活力.在接种量为7.1%、发酵温度为30 ℃的情况下发酵6 d,柚苷酶比合成速率与棘孢曲霉的生长速率符合模型Y柚苷酶=6.2677 X-0.0381,其中Y代表柚苷酶的比合成速率,X代表比生长速率.用Davis法测得柚苷酶活力为94.61 IU/g,酶发酵的培养基成本（5×10-5元/IU）远远低于其他同类研究,酶的纯度远高于用豆饼粉为氮源所获得的酶纯度.