结核分枝杆菌H37Rv株与耐异烟肼菌株间细胞壁蛋白质组双向电泳图谱比较

利用双向电泳技术可以对体外培养的结核分枝杆菌非耐药型菌株和耐药型菌株进行细胞壁蛋白质组学比较,寻找与耐药相关的蛋白质．结核分枝杆菌H37Rv株与耐异烟肼菌株在Middlebrook 7H9 Broth培养基中37℃摇床培养1个月后,从培养物中提取结核分枝杆菌细胞壁蛋白．以pH4～7的IPG预制胶条为第一向等电聚焦,以SDS-PAGE为双向电泳第二向,经过银氨染色,图像扫描后,利用软件分析处理图像．在结核分枝杆菌H37Rv株和耐异烟肼菌株的细胞壁蛋白质凝胶图谱中分别检测出499和582个蛋白质斑点．它们的蛋白质分子质量分布基本相似,其中有102个斑点差异显著．这为研究耐异烟肼菌株的耐药机制提供了蛋白质组学方面的信息．     

树突状细胞在抗结核分枝杆菌感染中的作用

树突状细胞（Dendritic cells,DCs）是最有效的抗原呈递细胞.DCs能够摄取外来物质,包括结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）,并将其呈递给效应性淋巴细胞,激发宿主对抗病原微生物感染的免疫反应.因此,树突状细胞与结核分枝杆菌的相互作用在感染初期机体发动免疫应答中十分重要.研究树突状细胞和结核分枝杆菌间的相互作用,有利于从根本上了解细菌-宿主作用机理,为阐明结核分枝杆菌逃避免疫的机制提供依据.     

结核分枝杆菌esat6-cfp 10融合基因的克隆表达及纯化

获得esat6-cfp 10重组蛋白,为研究其在结核病诊断和预防中的作用奠定一定基础。以结核杆菌H37,Rv基因组DNA为模板,克隆cfp10基因,将其插入到pGEM-7ZF( )克隆载体后与esat6基因连接,构建含有esat6和cfp10融合基因的克隆载体esat6-cfp 10。酶切消化esat6-cfp 10重组质粒,将esat6-cfp 10基因亚克隆到pPROEX^TM HTb原核表达载体,经IPTG诱导后,可表达出分子量约28kD的esat6-cfp 10融合蛋白,重组蛋白经镍柱纯化后,得到了高纯度的esat6-cfp 10融合蛋白。Western blot证明表达重组蛋白有较好的免疫原性。     

草分枝杆菌对赤铁矿、石英絮凝能力的比较

采用重力沉降法对草分枝杆菌絮凝赤铁矿、石英的能力进行了比较实验.结果表明,草分枝杆菌对赤铁矿的絮凝能力明显强于它对石英的絮凝能力,造成它们絮凝能力差异的主要原因是形成聚团结构的大小及其紧密程度的不同.     

结核杆菌原发耐药间隔五年对比分析

目的 :探讨归口管理对原发耐药菌的影响。方法 :回顾分析 1994- 1995年度与 1998- 1999年度结核杆菌原发耐药情况。结果 :1998- 1999年度原发耐药率较 1994- 1995年度明显下降。结论 :我院通过五年归口管理 ,降低了原发耐药菌的比例 ,但仍需进一步加强归口管理力度 ,从而有效控制原发耐药菌的发生。     

分枝杆菌细胞壁脂质PDIM致病机制研究进展

 结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis,MTB)是导致人和动物结核病的病原体。MTB细胞壁成分复杂,功能多样,不但帮助分枝杆菌抵御外界不良的生活环境,同时在细菌逃逸宿主免疫攻击和致病过程中也发挥重要作用。脂质占细胞壁干重的60%以上,其高含量与细菌毒力密切相关。MTB不含内毒素,也不产生外毒素和侵袭性酶类,其致病性主要与占细胞壁干重60%以上的脂质成分密切相关。PDIM(phthiocerol dimycocerosate)作为细胞壁组分中独特而重要的结构,在维持细菌正常结构上发挥重要作用。由于PDIM在细胞壁分布的广泛性,研究发现PDIM在病原体-宿主的相互作用过程中也扮演重要角色,尤其是在细菌的早期侵染及进入巨噬细胞环节中发挥积极作用。对PDIM重要致病和毒力损伤机制研究,不仅加深对病原体-宿主互作网络中的理解,还有望为结核病的治疗带来新的希望与突破。     

结核分枝杆菌抗酸染色装置的研制

为了改进结核杆菌传统抗酸染色方法的缺点,该文研制一种用于结核杆菌抗酸染色的装置,对该装置的设计、制备、功能及应用方法进行详细的介绍,具有稳定,易控制,操作简便等优点。     

液相芯片快速检测结核耐药基因方法建立

基于Luminex100^TM技术平台,结合多重PCR技术,以5’生物素标记引物为信号指示,在H₉37)RV结核标准株做对照下,对104株结核分枝杆菌分离株的LFP耐药rpoB基因和INH耐药的katG,inhA基因进行检测,并与药敏试验绝对浓度法和测序结果比较.结果表明:液相芯片检出结果与药敏法比较,104株分离株中LFP、INH、多重耐药的检出结果分别为:液态芯片检测73株、50株、48株;药敏检测结果为74株、58株、53株;对比检出率98.6%,86.2%,90.6%.液相基因芯片技术对耐药,耐多药结核的检测,具有特异性高,敏感性强的特点,是检测结核分枝杆菌耐药基因的有效方法,可用于临床检测.     

结核杆菌Ag85B的表达纯化

为构建抗结核病新型疫苗，以结核杆菌标准毒力株H37Rv DNA为模板，用PCR法克隆抗原85B的编码基因，将该基因重组到表达型质粒pQE30中，表达的His6 Tag-Ag85B融合蛋白分子质量约32ku，用亲和层析一步法纯化的重组蛋白纯度好，得率高，为进一步的免疫研究创造了条件。     

双向电泳和肽质谱技术分析结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞引致的差异表达蛋白

利用双向电泳及质谱技术对感染结核杆菌H37Ra株前后的巨噬细胞U937株的蛋白质组进行分离和比较分析．双向电泳后在分子质量20～200ku，等电点pI3～10范围内分离出1913个不同蛋白质斑点，肉眼可以明显看见4个蛋白质斑点在表达上的差异．对其中分子质量约75ku等电点约9．5的蛋白质斑点酶解后，进行质谱分析，鉴定为分子质量75．4ku、等电点9．52的蛋白DEAD／H Box Polypeptide 18．说明用蛋白质组学研究结核杆菌与巨噬细胞相互作用机理是可行的，所鉴定的蛋白质DEAD／H Box Polypeptide 18可能与巨噬细胞防御系统有关．