人纤溶酶原kringle5功能区基因在大肠杆菌中的表达

将人纤溶酶原kringle5功能区基因插入融合基因表达载体pET17bBamHⅠ位点,构建成重组质粒pETK23,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下,纤溶酶原kringle5功能区基因在重组转化菌株BL21(DE3,pETK23)中获得高效表达,表达产物以可溶性蛋白形式存在,表达量占菌体总蛋白的528%.     

人纤溶酶原Kringle 1 结构域在大肠杆菌中的克隆、表达和纯化

Ｐｌａｓｍｉｎ(ｏｇｅｎ)ｗａｓｋｎｏｗｎｆｏｒｉｔｓｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙａｓｗｅｌｌａｓｉｔｓω ａｍｉｎｏｃａｒｂｏｘｙｌｉｃａｃｉｄ ｂｉｎｄｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ.Ｏｎｅｈｉｇｈａｎｄ 4ｌｏｗ ａｆｆｉｎｉｔｙｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎｈｅａｖｙｃｈａｉｎ .Ｃｏｎｃｕｒ ｒｅｎｔｌｙ 5ｈｉｇｈｌｙｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｔｒｉｐｌｅｌｏｏｐｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｎａｍｅｄａｓｋｒｉｎｇｌｅｄｏｍａｉｎｓｗｅｒｅｆｏｕｎｄｆｏｒｍｉｎｇ…     

氨甲环酸与Wnt信号通路中含kringle结构域蛋白的结合对新生小鼠骨密度的影响

最近研究发现Wnt信号通路在骨形成过程中发挥重要作用Wnt受体如脂蛋白相关蛋白5（lrp5）和孤独受体（Ror2）的缺失或突变导致骨的不正常发育．Dkk是一个分泌型规范Wnt信号系统的抑制剂，通过与脂蛋白相关蛋白5和最近新发现的一种含kringle结构域的蛋白kremen形成三聚体复合物．这种复合物随即被细胞内吞，从而导致细胞表面Wnt受体脂蛋白相关蛋白5水平迅速下降，从而达到抑制Wnt信号通路的日地．通过对kremen和Ror2蛋白序列分析发现kremen和Ror2的胞外部分均含有一个结构上能与赖氨酸结合的kringle结构域．通过给怀孕母鼠注射一种赖氨酸类似物——氨甲环酸来研究kremen和Ror2的kringle结构域上的赖氨酸结合位点被占据对小鼠骨发育的作用．但是，研究结果表明AMCA组和对照组之间的骨密度并没有显著差异，揭示赖氨酸结合位点不参与骨的发育调控．     

人纤溶酶原Kringle5基因的克隆、表达及产物纯化和性质鉴定

根据人纤溶酶原的cDNA序列,利用PCR技术获得人纤溶酶原kringle5结构域的基因,并将其克隆至表达质粒pET25b( )中。重组载体pET25b（ ）/kringle5转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,经IPTG诱导表达,在12kD处可见明显的表达条带,表达产物大部分以无活性的包涵体形式存在。包涵体经过体外变复性,SP-SepharoseFF离子交换柱一步纯化,15%SDS-PAGE鉴定考染一条带,纯度达95%以上。所得到的目标蛋白明显的抑制bFGF诱导的牛毛细血管内皮细胞增生。     

人纤溶酶原K1—3区基因在大肠杆菌中的表达

将人纤溶酶原Krigle 1-3(K1-3)基因插入融合表达载体pET-17b,获得重组质粒pET-K13,转化E.coli BI21(DE3),在IPTG诱导下,人纤溶酶原K1－3基因在E.coli BI21(DE3,pET-K13)中获得高效融合表达,表达量占菌体总蛋白的24％,表达产物以包函体存在,Western blot证明重组 蛋白对人纤溶酶原抗血清有特异免疫原性。