光质和生长物质组合对怀山药零余子脱分化和再分化的影响

本文以怀山药优良品种“铁棍山药”为材料，研究了光质和生长物质的不同组合对零余子脱分化和再分化的影响．结果表明：(1)在愈伤组织诱导过程中6-BA与NAA的组合优于6-BA与2，4-D的组合；在6-BA 2mg/L(单位下同) NAA2和4培养基上，愈伤组织在白光和红光下出现的比较早，诱导率在白光、红光、黄光、蓝光、绿光及黑暗各条件下均能达到100％．(2)在愈伤组织分化过程中，在相同条件下的蓝光分化率最高(为100％)，红光和白光次之(分别为95％和91．7％)，绿光和黄光较低(分别为84．4％和75％)，黑暗最低(为22．6％)．     

旋光法测定薯蓣皂甙元含量

本文采用旋光法测定薯蓣皂甙元含量，平均回收率为100％，线性范围0．1～2．4mg／ml．Y＝0．9952。     

盾叶薯蓣组织培养及废液利用初探

盾叶薯蓣通过组织培养 ,提取薯蓣皂甙元的同时 ,综合利用盾叶薯蓣酸水解液中的糖分 ,作碳源营养培养基培养食用菌。接种培养 ,生长良好。     

不同电场强度和原生质体密度对马铃薯和薯蓣细胞融合效率的影响

体细胞电融合技术因其融合效率高、对细胞无毒害作用而愈来愈普遍地用于细胞工程技术操作中。为了准确地确定实验参数，试验采用一个组装的电融合仪和自制平行电极，以马铃薯和薯蓣为材料，研究了在不同原生质体密度和不同电场强度条件下的细胞融合效率。试验结果显示，以交变电场频率1．0MHz、电压140Vpp．cm-处理原生质体20－40秒，尔后施加瞬时直流高压（120kv）脉冲1－2次，可以获得73．5％─76．7％的融合细胞，其中11．5％─14．4％的融合细胞可发生正常分裂。在本试验设计范围内，电场强度对细胞融合频率的影响主要表现在融合细胞能否发生分裂，而初始融合频率在各处理间无显著差异。     

高效液相色谱法-蒸发光散射检测器测定盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的含量

建立以蒸发光散射检测器(ELSD)测定盾叶薯蓣中薯蓣皂苷含量的高效液相色谱分析方法,考察了不同产地盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的含量.色谱柱为HiQsil C18柱(250 mm×4.6 mm,10μm),流动相为乙腈-水(33∶67),流速为0.8 mL/min,柱温为室温.Alltech蒸发光散射检测器参数:载气为氮气,流速为2.5mL/min,漂移管温度为100℃,压力为0.45 Mpa.结果表明:薯蓣皂苷在0.35~3.48μg范围内有良好线性关系,r=0.9976,平均回收率为103.2%,RSD为1.61%(n=6).该方法快速简便,灵敏度高,结果准确可靠,可用于盾叶薯蓣药材中薯蓣皂苷的分析及质量检测与控制.     

光质和NAA组合对怀山药叶片脱分化的效应

不同光质和NAA组合对怀山药叶片脱分化的效应不同 ,结果表明 :各种光质下 ,(1)NAA浓度为2mg·L-1时 ,怀山药叶片愈伤组织形成的时间最早 ;NAA浓度为 2mg·L-1或 4mg·L-1时 ,出愈率最高 .(2 )愈伤组织中的可溶性蛋白含量和过氧化物酶 (POD)活性不同 :蓝光有利于愈伤组织中可溶性蛋白的形成 ,而黄光则有利于POD活性的提高     

铁棍山药试管苗快繁培养基的优化

研究了不同植物生长调节剂(TDZ、6-BA、KT和NAA)浓度及其组合对铁棍山药试管苗快繁的影响,结果表明:KT和NAA组合时,在MS+KT 2mg·L-1+NAA 0.02mg·L-1培养基中试管苗高度达7.67cm,但繁殖系数只有2.67;在KT和NAA组合的基础上再添加TDZ后,在MS+KT 2mg·L-1+NAA 0.02mg·L-1+TDZ 0.02mg·L-1培养基中试管苗繁殖系数提高到6.00,试管苗健壮且生长旺盛;在比较不同细胞分裂素(KT,6-BA和TDZ)与NAA组合对试管苗快繁的影响时发现,6-BA与NAA组合最不适合试管苗的生长,KT与NAA组合中的试管苗生长缓慢,繁殖系数低,TDZ与NAA组合的培养基中有类原球茎形成.因此,综合以上研究结果,本实验认为KT、TDZ和NAA组合的培养基(MS+KT 2mg·L-1+NAA 0.02mg·L-1+TDZ 0.02mg·L-1)更适于铁棍山药试管苗的快繁.     

山药基因组DNA的提取和RAPD反应条件的优化

研究了山药基因组DNA的提取方法;对Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和Taq酶用量进行了优化,建立了最佳的RAPD反应体系:在25μL反应体系中Mg2+浓度为2.0 mmol.L-1,dNTPs浓度为0.25 mmol.L-1,引物浓度为20 pmol.L-1,Taq酶1.5 U,模板DNA为200 ng.扩增程序为:95℃预变性7 min;94℃变性30 s,36℃退火45 s,72℃延伸2 min,共35个循环;72℃终延伸10 min.     

山药总RNA不同提取方法的比较研究

为提取高质量的山药总RNA,以铁棍山药茎段为材料,采用Trizol法、RNAiso for Polysacchariderich Plant Tissue法、改良CTAB法和试剂盒法提取总RNA,利用琼脂糖凝胶电泳分析所提取RNA的完整性,并用超微量分光光度计分析RNA的纯度.结果显示采用Trizol法难以提RNA,RNAiso for Polysacchariderich Plant Tissue法提取效果不理想,存在DNA和蛋白质污染,而用改良CTAB法和试剂盒法提取到的总RNA纯度高、完整性好,其中,改良CTAB法较试剂盒法价格便宜,但提取过程较烦琐.因此,应根据实验需要选择CTAB法或试剂盒法提取铁棍山药总RNA.本结果对其他品种山药或富含多糖多酚类物质植物的RNA的提取也具有一定借鉴意义.     

农杆菌介导的怀山药叶片瞬时表达方法的建立

高效的瞬时表达体系是方便、快捷的研究怀山药基因启动子活性、基因功能和生产重组蛋白的新途径.本研究选取怀山药叶片为受体,以β-葡糖醛酸酶(GUS)和绿色荧光蛋白(GFP)的基因为报告基因,对共培养时间进行分析,得到二者瞬时表达的最初时间以及较佳观察时间,建立根癌农杆菌介导的怀山药瞬时表达技术体系.结果显示:当注射的菌液浓度OD600=0.6,共培养3d时,GUS基因和GFP基因开始有表达,二者适于观察的共培养时间分别为5d和4d.