高活力天冬氨酸酶的分离提纯及性质

采用基因工程技术构建具有较高活性的突变菌株 Ｔ３３， 以它为产酶菌株分离提取天冬氨酸酶， 并研究它的酶学特性． 结果表明， 分子量为 １９０ ０００． 最适反应 ｐ Ｈ＝ ８０， 最适反应温度为 ３７ ℃． 在ｐ Ｈ＝ ６０ 时， 该酶呈负协同效应； 在ｐ Ｈ＝ ８０ 时， 该酶呈正协同效应． 该酶α螺旋度为３６３％     

双水相体系纯化天冬氨酸酶、纤维素酶和脂肪酶

用聚乙二醇(PEG)/磷酸钾双水相抽提技术分别从天冬氨酸粗酶、商品纤维素酶和脂肪酶中分离纯化出天冬氨酸酶(Aspartase)、纤维素酶(Cellulase)和脂肪酶(Lipase)。研究了PEG分子量及浓度、磷酸钾浓度、蛋白质含量、pH、氯化钠浓度等因素对分配系数,酶活回收率和分离效果等参数的影响,并设计出双水相体系抽提三种酶的相组成系统。     

天冬氨酸酶的分离提纯及其变性复性的研究

以E.Coli J-3为原料,经菌体破碎、链霉素处理、热处理、硫铵分级、磷酸钙胶处理、DEAESephadex A-50柱层析、羟基磷灰石柱层析、Ultrogel AcA 34凝胶过滤、HPLC层析九个步骤,得到聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳纯的天冬氨酸酶。并探讨了各种环境因素对变性复性程度的影响。结果表明,不同的变性、复性条件会诱导不同构象的产生。诱导酶的性质与天然酶不同。     

聚乙烯醇固定化细胞生产L－天门冬氨酸的研究

用聚乙烯醇作为主要载体，用共混、复合和加入事种助剂的方法，对固定天门冬氨酸酶的大肠杆菌，研究了固定化细胞的性质及固定化细胞的储存稳定性。探索了固定化细胞间隙和连续发酵生产Ｌ－天门冬氨酸的生产工艺．获得了间隙和连续发酵的生产能力及固定化细胞的半寿期．     

天冬氨酸酶C端缺失突变酶基因的克隆和表达

利用多聚酶链反应（PCR）技术,从天冬氨酸酶基因的3'-端删除42个碱基,缺失突变基因经克隆、转化和筛选,得到一株有C端缺失14肽的天冬氨酸酶突变体表达的转化子．突变酶纯酶活性为野生型酶的1．21倍．圆二色谱和荧光光谱的研究表明,突变酶的结构比野生型酶松散或更具柔性,天冬氨酸酶C端14肽不是其功能所必需的．     

天冬氨酸酶基因工程菌质粒pXZ70的稳定性

将pSC101质粒上的Par区域（控制质粒分配的基因座）克隆到含有天冬氨酸酶基因的质粒pXZ70上，构建成重组质粒pZZ1，将pZZ1质粒转化入大肠杆菌JM109细胞中，得到一株质粒可稳定遗传的重组子细胞，培养100代后，含质粒菌数仍在90％以上．