刚地弓形虫培养上清抑制THP-1细胞增殖及诱导凋亡的研究

摘要：目的提取弓形虫体外细胞共培养上清,并研究上清对人急性单核细胞白血病细胞THP-1增殖及凋亡的影响。方法收集对数生长期的THP-1细胞以5X10^7／ml细胞浓度接种于不同培养瓶中,对照组加入含10％胎牛血清的RPMll640,实验组加入相同体积不同数量（2×10^7／ml、4X10^7／ml、8×10^7／m1）弓形虫速殖子培养上清,采用四甲基氮噻唑蓝（MTY）法检测吸光度（A490值）并计算THP-1细胞增殖抑制率;倒置显微镜下观察细胞形态变化;Annexin-V-FITC／PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率变化,以Western印迹方法分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达或活性。结果MTY法检测结果弓形虫培养上清呈时间剂量依赖性抑制THP-1细胞株增殖,倒置显微镜下观察处理组细胞有发泡现象和凋亡小体出现。流式细胞仪检测弓形虫感染后的THP-1细胞凋亡率较对照组有升高趋势（P〈0．05）,呈量效依赖性,Westernblot检测刚地弓形虫培养上清作用于THP-l细胞48h后实验组的Bax、Bcl-2蛋白表达较对照组的比值分别有明显的升高与降低（P〈0．05）。结论刚地弓形虫速殖子培养上清对体外培养THP-l细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导THP-1细胞凋亡。     

RH株弓形虫抗原及高效价多克隆抗体的制备

通过制备和分析弓形虫抗原蛋白，并以此抗原制备高效价的兔抗弓形虫多克隆抗体，为弓形虫的免疫检测和诊断提供有效的方法和途径，同时也为基因工程产物的鉴定提供方便有效的检测手段．速殖子主要来源于感染后72～74h获得的腹水，通过常规方法制备和提纯弓形虫可溶性抗原，采用SDS-AGE方法分析抗原蛋白的分子量．以抗原和福氏佐剂制备成完全和不完全福氏佐剂通过脊柱两旁皮下多点免疫的途径免疫新西兰大白兔，制备兔抗弓形体多克隆抗体，间接ELISA法检测血清中抗体的效价．经过观察所获得的虫体阶段主要处在宿主细胞巨噬细胞内而尚未逸出阶段，通过对结果的分析，所制备的弓形体抗原的分子量主要集中在17～156ku之间，与文献报道有差异，兔抗弓形体抗体效价在60000以上．该研究结果将为弓形体的蛋白质研究，免疫诊断、预防及有效治疗奠定基础．     

特殊人群弓形虫感染的研究进展

目的:了解特殊人群弓形虫感染情况.方法:查阅近几年来国内外有关文献资料,了解特殊人群弓形虫感染状况.结果:特殊人群弓形虫感染率较普通人群高.结论:特殊人群对弓形虫普遍易感,应加强防治.     

吉林地区孕妇弓形虫感染的免疫学检测临床研究

目的探索吉林地区孕妇弓形虫感染情况.方法运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测196例孕妇(妊娠8周～7个月)静脉血中弓形虫(Toxoplasma godii,TO)抗体,即Tox-IgG抗体和Tox-IgM抗体.结果发现有猫犬接触史(指现在或曾经养过猫犬的)的孕妇弓形虫感染率明显高于无猫犬接触史的孕妇(P<0.01),两者有显著性差异;但城市与乡镇孕妇弓形虫感染率无显著性差异(P>0.05);而首次妊娠孕妇与非首次妊娠孕妇弓形虫感染率有显著性差异(P<0.05).结论有无猫犬接触史是孕妇感染弓形虫的主要因素,二者相关性显著.     

鼠腹腔中弓形虫的增殖发育及S.D.对其的影响

对鼠腹腔中弓形虫速殖子的增殖发育的方式、过程及S.D.对其的影响作了详细的考察,结果表明弓形虫的无性生殖方式有内二裂殖、纵二裂殖、裂殖生殖等,虫体以鼠腹腔内巨噬细胞的胞壁作为假包囊壁有其中增殖发育,经过72h的增殖生长,虫体成熟后突破假包囊逸出,S.D.可部分抑制速殖子增殖。     

148例孕妇弓形虫感染分析

对１４８ 例孕妇（妊娠八周至妊娠七个月），运用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测静脉血弓形虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍ ａ ｇｏｄｉｉ， ＴＯ）抗体；即Ｔｏｘ－ＩｇＧ抗体和Ｔｏｘ－ＩｇＭ抗体，发现近年来有猫犬接触史（指现在或曾经养过猫犬的）孕妇弓形虫感染率明显高于无猫犬接触史孕妇（Ｐ＜ ０．０５），两者有显著性差异。     

RH株弓形虫无性生殖期E/S蛋白动态变化及功能推测

对RH株弓形虫在鼠体内无性生殖的不同时期分泌／排泄蛋白（E／S），采用SDS－PAGE技术进行了研究，结果表明在无性生殖的不同时期E／S呈现动态的变化，P93出现于感染后第1天，P72、P39．5、P30、P24．5、P23．5、P14．4出现于感染后第2天，P45．5、P43、P27出现于感染后第3天。     

刚地弓形虫RH株感染对BALB／c小鼠情绪行为的影响

目的研究刚地弓形虫RH株感染对BALB／c小鼠学习记忆行为的影响及可能机制。方法将72只周龄、大小相近的雄性BALB／c小鼠采用随机数字表分为生理盐水对照组与不同数量（3×10^3／ml、3×10^4／ml、3×10^5／m1）弓形虫RH株感染组,每组18只。于感染第5周从每组各随机抽取6只分别进行高架十字迷宫实验、旷场实验及强迫游泳实验,观察各组小鼠在实验中情绪行为变化。并记录各项指标进行统计分析。结果在高架迷宫试验与旷场实验中,3×10^3／ml弓形虫感染组小鼠与生理盐水对照组小鼠比较,各项行为学指标无明显差异。在3×10^4／ml、3×10^5／ml弓形虫感染组小鼠与对照组小鼠比较出现明显降低（P〈0．05）．以3×10^5／ml感染组最为明显,其小鼠运动活力（0E＋cE）、进入开放臂次数比例（OE％）、开放臂停留时间比例（OT％）小鼠爬行总格数、中央格在总格数中比例分别为11．08±2．12、28．73±0．59％、25．62±2．33％、32．30±17．26、2．42±0．65％。在强迫游泳试验中,各弓形虫感染组小鼠游泳的静止时间均高于对照组小鼠（P〈0．05）,3×10^5／ml感染组静止时间最长,达226．6±1．9S。结论刚地弓形虫RH株感染可引起小鼠情绪行为改变,具有焦虑抑郁倾向。     

抗弓形虫IgY抗体在酶免疫试验中的应用

IgY是从鸡蛋黄中提取的免疫球蛋白,不但具有高免疫活性,而且不受类风湿因子、血清补体等干扰,在免疫学试验中具有优越性。用纯化的弓形虫虫体抗原免疫白菜杭鸡获得特异性的IgY抗体,用辣根过氧化物酶标记后与抗人IgM单抗配伍建立捕获法酶免疫试验,与同类试剂对照,平行检测192份临床血样,检测结果二者吻合,表明该IgY具有良好的特异性和敏感性。     

弓形虫传播模型的稳定性分析

为了研究控制弓形虫病传播的临界值,对疾病进行有效预防,并进行相关的理论分析与研究,针对弓形虫的生活史以及传播途径建立数学模型,分析得到了决定疾病是否继续存在以及传播的基本再生数,当基本再生数小于1时,疾病将逐渐消亡,最终灭绝,当基本再生数大于1时,模型存在唯一的地方病平衡点,此时疾病将一直持续下去,形成地方病。通过建立合适的Lyapunov函数等方法,给出了无病平衡点和地方病平衡点全局渐近稳定的充分条件,同时对建立的数学模型进行了系统、完整的定性和稳定性研究。研究结果对后续弓形虫病的研究及其数学模型的建立有一定的借鉴意义。