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采用TAIL-PCR技术,对随机选取的 6 个HDF-68阳性T-DNA转化子进行扩增,只利用1 d的时间,即获取了T-DNA标签侧翼序列（FSTs）,对其序列进行分析后,分析了影响TAIL-PCR扩增的主要因素.该项研究,为从T-DNA的突变子中分离紫杉醇产生菌产紫杉醇的相关基因提供了一条可行途径,也为阐明紫杉醇产生菌的代谢途径以及最终构建高产基因工程菌株奠定了基础. 相似文献
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利用TAIL-PCR方法克隆拟南芥干旱主效基因NCED3 总被引：1，自引：0，他引：1
利用远红外成像技术筛选得到一株T-DNA插入的干旱敏感突变体,并成功利用TAII,PCR技术克隆到该突变基因为NCED3,该基因编码植物体内ABA合成的关键限速酶,突变体在干旱胁迫下不能合成ABA而表现出不耐干旱的特性.最后通过PCR及RT PCR方法验证了TAIL-PCR结果的的靠性. 相似文献
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一种DNA侧翼序列分离技术--TAIL-PCR 总被引：15，自引：0，他引：15
在分子生物学研究中，基因克隆和分子杂交的探针制备等操作常需分离与已知DNA序列邻近的未知序列，热不对称交错PCR(简称TAIL—PCR)反应技术能够较好地解决上述难题。该技术通过3个嵌套的特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环，利用不同的退火温度选择性地扩增目标片段，所获得的片段可以直接用做探针标记和测序模板。TAIL—PCR技术简单易行，反应高效灵敏，产物的特异性高，重复性好，能够在较短的时间内获得目标片段，已经成为分子生物学研究中的一种实用技术。笔综述了TAIL-PCR反应的原理、引物设计、反应条件设置及产物分析。 相似文献
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利用T-DNA插入突变的方法从拟南芥中筛选得到1个角果果柄生长角度变小的突变体,克隆得到该突变基因为SPA基因,并利用PCR和RT-PCR方法验证了T-DNA的插入位点;将SPA基因转入spa突变体后,互补植株角果角度恢复到野生型水平．推测SPA基因可能在调控角果角度方面具有重要功能．关键词 拟南芥;角果角度;SPA基因;TAIL-PCR 相似文献
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中国梨S RNase基因启动子的TAIL PCR 克隆及功能预测 总被引：1，自引：0，他引：1
利用TAIL PCR技术从中国砂梨品种‘金花’、‘懋功’及白梨品种‘鸭梨’基因组DNA中分 别扩增出长度为854、1 448和1 137 bp的S13-、S12-、S21-RNase基因5′端上游序列,并提交 GenBank,序列号为HM047239、HM047240、HM047241。经PLACE和PlantCARE软件顺式调控元件预测发 现,这3个启动子均具有典型核心启动子TATA 盒和 CAAT 盒,且在上游均存在光应答调控元件(box 4,G box)、脱落酸应答元件ABRE及水杨酸应答元件TCA element等,由此可知其可能受光照、脱 落酸、水杨酸等多种条件的共同调节。此外,与已知日本梨S2-、S3-、S4-、S5-RNase基因启动子序 列比对发现,S RNase启动子TATA盒上游存在一约200 bp的同源区域。以MEG 4.0构建系统发育树表 明,梨属和苹果属S RNase等位基因多态性可能在亚科的分化之前就已形成。 相似文献
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利用TAIL-PCR技术,克隆到了与辣椒素合成有关的胎座特异表达基因——3-酮酯酰．ACP合成酶基因（Kas）上游400bp的调控区域．将其全长片段与GUS基因连接构建植物表达载体并转化烟草．GUS组织化学染色表明,克隆到的440bp片段具有启动子活性．对该片段进行序列分析发现,在起始密码子ATG上游存在2个TATA-box,分别为-316～-311位的TATAAA和-224～-219位的TATAAA;在TATA-box上游还存在1个位于-378～-374处的CAAT-box,序列为CCAAT．该研究旨在为利用基因调控辣椒素的生物合成,提高辣椒果实中的辣椒素含量奠定基础． 相似文献
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