仁用杏SRAP-PCR体系的正交设计优化

改良CTAB法提取仁用杏基因组DNA,用于建立SRAP-PCR体系。采用L16（44）正交设计试验,对影响仁用杏SRAP-PCR反应体系的4因素（dNTPs浓度、Mg^2＋浓度、引物浓度、Taq聚合酶量）4水平进行筛选,PCR结果经统计软件SPSS V13.0分析,并对退火温度进行了摸索,确立了仁用杏SRAP-PCR的优化体系：总体积为20 L,dNTPs浓度为0.2 mmol/L,Mg^2＋浓度为2.5mmol/L,引物浓度为0.9μmol/L,Taq聚合酶量为1.5 U,退火温度为52℃。本优化体系为仁用杏资源遗传分析奠定了技术基础。     

西葫芦SRAP—PCR退火温度的优化及遗传多样性分析

以西葫芦为试材,利用梯度PCR技术,对SRAP-PCR过程中的两步退火温度进行了试验研究。结果表明：通过对第一步前5轮循环的退火温度梯度37-50℃的试验,其退火温度可提高到41℃;对第二步后30轮循环的退火温度梯度50-60℃的实验,其退火温度可提高到52℃。应用该程序在29个西葫芦自交系间进行扩增,均获得了良好的结果,并对29个自交系进行了遗传多样性分析。