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1.
The interleukin 1β (IL-1β) cDNA was cloned from the red seabream (Pagrus major) by homology cloning strategy. A cDNA fragment was amplified by PCR using two degenerated primers, which were designed according to the conserved regions of other known IL-1β sequences, and elongated by 3' ends and 5' ends RACE PCR to get the full length coding sequence of red seabream IL-1β (RS IL-1β). The sequence contained 1252 nucleotides that included a 5' untranslated region (UTR) of 84bp, a 3' UTR of 410 bp and an open reading frame (ORF) of 759 nucleotides which could be translated into a putative peptide of 253 amino acids with molecular weight of 28.6 kD and putative isoelectric point pI of 5.29. The deduced peptide contained two potential N-glycosylation sites and an identifiable IL1 family signature, but lacked the signal peptide and the clear ICE cut site, which were common in other nonmammalian IL-1β genes. The RS IL-1β had the highest homology with piscine IL-1β according to phylogenetic tree analysis. 相似文献
2.
3.
Molecular cloning and nucleotide sequence of classical swine fever virus strain Shimen 总被引:2,自引:0,他引:2
According to the previously published CSFV sequences, 18 paris of partially overlapping primers which span the entire genome
of CSFV strain Shimen were designed and synthesized. Each cDNA fragment of strain Shimen was amplified by RT-PCR method from
the anticoagulant blood of strain Shimen infected pig. The PCR fragments were cloned into pGEM-T vector respectively and sequenced.
The results show that we have obtained the nucleotide sequence of strain Shimen. The viral RNA consists of 12 297 nucleotides
including noncoding regions of 373 and 227 bases at the 5′ and 3′ end, respectively, and a single large open reading frame
spanning 11 697 nucleotides in the middle, which encodes an amino acid sequence of 3 989 residues with a calculated molecular
weight of 437.6×103. The precisely sequencing of 5′ and 3′ termini is undertaking.
Supported by the National Pandeng Project
Huang Qianhua: born in 1968. Graduate student 相似文献
4.
选择两段血小板反应素(TSP-1)中抑制血管再生的活性片段,设计两对引物,使用RT-PCR的方法从人血细胞中进行克隆并对获得片段进行测序验证.克隆片段大小分别为723和522bp,命名为聪P-1-1和聪P-1-2.利用原核表达载体pET-29a获得大肠杆菌重组子,重组子经过IPTG诱导以包涵体的形式表达相应的多肽片段.再对包涵体进行体外溶解、纯化,得到了目的多肽. 相似文献
5.
极端嗜热厌氧纤维素分解菌基因文库的构建及其内切葡聚糖酶基因片段的克隆 总被引:6,自引:1,他引:6
以从云南邦拿掌温泉中分离、纯化的高温厌氧纤维素分解菌邦2菌(Cadicellulosiruptor)为材料,制备其总DNA,经限制性核酸内切酶EcoRⅠ部分酶切后,在T4DNA连接酶的作用下与经EcoRⅠ完全酶切、去磷酸化的质粒载体pUC18连接,然后转化E.coliJM109,建立了邦2的基因文库,经筛选鉴定得到6.3×103个重组子;重组子经刚果红平板验证:约有23.5%菌落呈现透明圈;重组子经EcoRⅠ酶切验证显示:重组质粒均含有外源DNA插入片段.结果表明已克隆到邦2菌纤维素酶系中的内切葡聚糖酶基因(ED基因)片段. 相似文献
6.
7.
纳豆激酶基因克隆及其在大肠杆菌中活性表达研究 总被引:5,自引:1,他引:5
以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增了纳豆激酶基因(natto kinase gene)中编码前肽、成熟肽的核苷酸序列(pro-NK),构建大肠杆菌表达质粒pTYB102,转化大肠杆菌ER2566。在IPTG诱导下,分别在15℃(14h)、30℃(3h)、37℃(2h)条件下培养,pTYB102均能表达出有活性的纳豆激酶。实验证实纳豆激酶基因得到活性表达需要Pro序列。SDS-PAGE表明,15℃和30℃和37℃培养表达的杂蛋白更少。薄层扫描测定表达的纳豆激酶占菌体总蛋白30%以上。 相似文献
8.
本文分别采用粘度法,膜渗透法和凝胶渗透色谱法对国产溶液法PMMA分子量及其分布进行了测定,结合熔融指数数据并与国外产品进行比较,笔者认为,分子量、分子量分布和聚合物链结构是影响PMMA加工性能的重要因素。 相似文献
9.
发展了一种机上快速活化分子筛色谱柱的方法。活化温度300~320℃,全部活化时间只需要3h,为常规活化方法的三分之一,活化效果优于现有方法。该方法用于探井井口气分析,取得了较好的经济效益。 相似文献
10.
大熊猫IL-2基因的克隆与序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
本实验应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从ConA诱导培养的大熊猫外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到大熊猫IL-2基因,并将其克隆到PGEM-T载体中.经菌落PER鉴定、序列测定及序列分析,结果表明,经克隆得到的IL-2基因开放阅读框由465个核苷酸组成,编码一个由155个氮基酸组成的多肽,包括编码20个氨基酸的信号肽和135个氨基酸的成熟肽,该基因(已在Genbank中登录,序列号为:DQ852339)与已知的其他哺乳动物如犬、猫、人、猪、牛、羊、马、兔、鼠等的IL-2核苷酸同源性在66.5%(鼠)~91.5%(犬)之间;IL-2编码氨基酸同源性在54.8%(鼠)-85.2%(犬)之间;进化树构建结果表明大熊猫与犬亲缘关系最近. 相似文献