MS-RDA的改进及在白背飞虱的应用研究*

甲基化敏感性代表性差异分析方法（MS-RDA）适用于特异、低丰度基因组DNA甲基化的筛查与鉴定，已大量应用于哺乳动物的疾病发生和植物发育机理方面的研究，但昆虫中尚未发现该方法的应用。从DNA提取、酶切、扩增子制备、消减杂交等方面对该方法进行了改进，并在水稻重要害虫白背飞虱上得到成功应用，获得了4条与雌、雄性别相关联的特异性甲基化差异条带，其中有3条序列已被GenBank收录，登陆号分别为JX847621、JX624161、JX472453，经BLAST比对，有3条未发现同源性序列，属于功能未知的新基因；同时还获得了2条与长短翅型相关联的特异性甲基化差异条带，也已被 GenBank 收录，登陆号分别为 JX514031、JX472454，同源性分析发现与多种动物的18S核糖体和28S核糖体RNA基因序列高度相似，因此有关核糖体基因的甲基化可能对白背飞虱的翅型分化起到一定的调控作用。     

甲状腺癌甲基化差异片断的筛选

目的筛选甲状腺癌与甲状腺癌旁组织的甲基化差异片段。方法采用甲基敏感性代表性差异分析（MS-RDA）方法,用甲基化敏感性内切酶消化甲状腺癌及癌旁组织基因组DNA,连上接头制备扩增子后,进行两轮消减杂交,筛选甲状腺癌与癌旁组织的甲基化差异片段。结果经过两轮消减杂交后,筛选出3个低甲基化差异片段,2个高甲基化差异片断。筛选出的低甲基化差异片段C913位于BC029276基因上,该基因编码一种rRNA结合蛋白,可能与肿瘤有关。另外2个低甲基化差异片段C915与C917尚未见相关结构和功能的报道。两个高甲基化差异片断与已知基因同源性在20%-35%之间。5个片断均为新的甲基化差异片断。结论在甲状腺癌组织中存在异常甲基化,筛选出的甲基化差异片断有助于进一步了解异常甲基化在甲状腺癌发生发展中的作用。