HCV基因分型在丙肝诊断和治疗中的应用

目的 建立ＨＣＶ基因分型方法，研究ＨＣＶ基因型与肝病程度的关系，探讨ＨＣＶ基因型与ＩＦＮ－ａ２ｂ抗病毒疗效的关系。方法 ＨＣＶ基因组ＮＳ５区ＰＣＲ扩增产物酶切分型。结果 ７３例ＨＣＶ感染者中有ＨＣＶⅡ型４５例，ＨＣＶⅢ型２８例。Ⅱ型ＨＣＶ感性肝炎３１例，肝硬化１４例；Ⅲ型ＨＣＶ感染者中有慢性肝炎２６例，肝硬化２例。Ⅱ型ＨＣＶ感染者的肝硬化发生率显著高于Ⅲ型ＨＣＶ感染者（Ｐ〈０．０５）。所有病人均应     

γTNFβ体外杀伤肿瘤细胞的研究

用ＭＰＧ吸附层析法所制备的ＨｕＩＦＮ－γ／ＨｕＴＮＦβ重组双功能杂交蛋白（简称γＴＮＦβ）［１］去处理人宫颈癌细胞株ＭＥ１８０、胃癌细胞株７９０１和肺癌细胞株Ｇ６，结果表明此杂交蛋白对这三个细胞株都有明显的杀伤作用，其杀伤率显著高于同剂量的ＩＦＮ－γ或ＴＮＦ－β；用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法观察γＴＮＦβ在不同时间、不同剂量条件下对Ｇ６的增殖抑制，可得到同样的结论。用γＴＮＦβ与丝裂霉素Ｃ（Ｍｉｔｏ－Ｃ）一起处理胃癌７９０１细胞，结果表明在Ｍｉｔｏ－Ｃ１．０μｇ／ｍＬ浓度以下、γＴＮＦβ５０ｕ／ｍＬ浓度以下，两者具有良好的抑病协同效应。用γＴＮＦβ处理胃癌、肺癌细胞以及ｙγＴＮＦβ与化学细胞毒性药物协同抑癌尚未见有报道。本文的结果为深入研究γＴＮＦβ可能具有更有效的抗癌效应提供了实验依据。     

重组人干扰素α2b和胸腺肽αl融合蛋白的分离纯化

考察了大肠杆菌E.coli表达的重组人干扰素α2b和胸腺肽αl融合蛋白包涵体的变性、复性及融合蛋白的分离纯化过程。实验结果表明：包涵体经7mol/L盐酸胍,10mmol/L DTT变性;1mol/L尿素,2mmol/L还原型谷胱甘肽,0.2mmol/L氧化型谷胱甘肽脉冲加样稀释复性;金属螯合层析收集0.3mol/L咪唑洗脱峰,冷干后经重组肠激酶30℃酶切24h、Sephadex G50 柱纯化,可得到纯度达90%的重组人干扰素α2b和胸腺肽αl融合蛋白,且最终目的融合蛋白产量达68mg/g干菌体。     

HuIFN－γ／HuTNF－β重组双功能杂交蛋白的分离和初步纯化

本文对Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１菌株的外源基因表达产物＂人γ－干扰素／人β－肿瘤坏死因子重组双功能杂交蛋白＂（ＨｕＩＦＮ－γ／ＨｕＴＮＦ－β简称γＴＮＦβ）进行了分离和初步纯化，并将产物作了抗病毒和细胞毒活性检测。结果表明，此初步纯化的γＴＮＦβ的细胞毒活性为１．４×１０６ｕ／ｍｇ·ｐ；抗病毒活性为１．７×１０６ｕ／ｍｇ·Ｐ。这一方法的建立，为进一步分离纯化γＴＮＦβ打下了基础。     

赛若金对HepG2.2.15细胞株HBV复制的抑制作用

以转染有ＨＢＶ的ＨｅｐＧ２．２．１５细胞株为实验模型,用ＭＴＴ法测定赛若金对２．２．１５细胞的生长抑制作用,流式细胞仪测定药物对２．２．１５细胞周期时相的改变,通过ＥＬＩＳＡ方法观察赛若金对２．２．１５细胞分泌ＨＢｅＡｇ及ＨＢｓＡｇ的影响,ＰＣＲ－Ｈｙｂ杂交法检测赛若金对２．２．１５细胞ＨＢＶ ＤＮＡ复制的抑制作用。结果显示,赛若金对转染乙肝病毒的２．２．１５细胞有生长抑制作用,抑制率随药物浓度呈     

复乳法及其改良法制备的干扰素PLGA微球载药释药特性的对比

改良法在复乳法基础上结合了海藻酸钠与Ca2+螯合形成缓释凝胶的原理。分别用上述两法制备蛋白药物干扰素α-1b的聚乳酸聚乙醇酸(PLGA)微球,以包封率、载药量等为指标,评价其理化性质;扫描电镜观察微球内外形态,软件计算其结构参数;用表面蛋白染色、激光共聚焦显微镜观察蛋白在微球表面及骨架内的分布情况;考察微球体外释药行为。与复乳法相比,改良法所得微球有较高的包封率和载药量(61.85%,0.724 3%),表面孔洞少、孔隙率低;内部孔洞大而少,孔隙率无显著差异;蛋白更多地分布在微球内部孔洞壁上而非表面;突释显著降低,缓释时间延长至20 d以上,30 d累积释药约70%。表明改良法所得微球载药释药性能较好,释药符合缓释制剂标准。