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核酶的化学合成及其对烟草花叶病毒RNA片段的体外剪切 总被引:1,自引:0,他引:1
设计并用化学方法合成了针对烟草花叶病毒RNA的核酶RZ-1及RZ-1小型化的核酶RZ-2以及它们的底物RNA片段Sb,研究了两种核酶对底物Sb的体外催化活性,并把核酶Rz-1与生物合成的相同组成的核酶Rz-1’进行了比较试验。 相似文献
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研究一个烟草花叶病毒(TMV)cDNA3′末端被特异切割的发夹核酶对感染原生质体的作用。选用一个外源基因绿色水母荧光蛋白(GFPuv)作为报道基因,取代了大部分的CP编码区域,以研究在烟草原生质体中发夹核酶对TMV载体的复制,通过GFP的表达来确定表达量。顺式发夹核酶对TMV载体感染效率的影响通过体外转录来观察。TMV GFPRIB体外转录感染原生质体的效率比与其不含该核酶的对应物的感染效率高3~5倍。Northern杂交结果表明,包括核酶在内的3’末端非病毒序列在体外转录反应开始后就被顺式发夹核酶切除了。当直接用载体DNA pSTMVGFPRIB感染原生质体时,感染原生质体的数量比与之相对应的pSTMVGFP NOS感染原生质体数多50%~80%。 相似文献
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目的确定人表皮生长因子受体-2(HER-2)特异性锤头状核酶(hammerhead ribozyme,RZ)对雌激素受体阴性乳腺癌细胞MDA-MB-453的影响.方法应用RT-PCR、免疫细胞化学检测RZ对MDA-MB-453细胞HER-2表达的影响;MTT法检测RZ对细胞增殖的影响.结果RZ转染入MDA-MB-453细胞中,RT-PCR检测出转染RZ的MDA-MB-453细胞中HER-2 mRNA表达量明显下降;免疫细胞化学方法检测细胞内的HER-2蛋白表达下降;MTT法检测细胞增殖活性明显受抑.结论RZ在MDA-MB-453细胞内有效抑制靶基因HER-2mRNA和蛋白的表达,同时可抑制细胞增殖,有助于进一步研究雌激素受体阴性乳腺癌细胞HER-2信号转导通路. 相似文献
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核酶转基因载体的构建及在烟草原生质体中对TMV感染的抑制作用 总被引:2,自引:0,他引:2
设计切割烟草花叶病毒RNA的锤头型核酸Rz-2,分别以pKyLx7和pBin19为载体,构建含Rz-2基因及核酸和底物连接的RzSb-2基因的重组质粒,通过三亲交配将目的基因转入土壤农杆菌中的Ti质粒.重组Ti质粒通过PEG法转化烟草原生质体,同时对转化的原生质体接种TMVc一定时间后以半叶法检测原生质体中病毒的侵染性.结果表明转基因原生质体中TMV侵染性明显低于未转基因的对照,推测病毒在转基因的原生质体中复制受到干扰;且核酸Rz-2(正向)表达后作用最为明显,核酸连底物RzSb-2(正向)与RzSb~2(反向)之间有明显差别. 相似文献
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Ultrasensitive monitoring of ribozyme cleavage product using molecular-beacon-ligation system 总被引:1,自引:0,他引:1
MENG XiangXian TANG ZhiWen WANG KeMin TAN WeiHong YANG XiaoHai LI Jun GUO QiuPing 《科学通报(英文版)》2007,52(5):603-607
This paper reports a new approach to detect ribozyme cleavage product based on the molecular-beacon-ligation system. The molecular beacon, designed in such a way that one-half of its loop is complementary to ribozyme cleavage product, is used to monitor ligation process of RNA/DNA com-plex in a homogeneous solution and to convert directly cleavage product information into fluorescence signal. The method need not label ribozyme and ribozyme substrate, which is fast, simple and ultra-sensitive for detection of cleavage product. Detection limit of the assay is 0.05 nmol/L. The cleavage product of hammerhead ribozyme against hepatitis C virus RNA (HCV-RNA) was detected perfectly based on this assay. Owing to its ultrasensitivity, excellent specificity, convenience and fidelity, this method might hold out great promise in ribozyme reaction and ribozyme gene therapy. 相似文献
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基因治疗及其研究进展 总被引:3,自引:0,他引:3
宋新强 《信阳师范学院学报(自然科学版)》2002,15(4):473-477
基因治疗作为一种新型的疾病治疗手段 ,正在广泛用于血友病、糖尿病、癌症、心血管病、爱滋病等多种疾病的治疗领域 .基因治疗的一般步骤包括 :目的基因的转移和目的基因的表达两个方面 .其中目的基因的导入和目的基因表达的精确调控是两个关键步骤 .新发展的还有反义疗法以及应用核酶进行基因治疗等 .本文就基因治疗的基本步骤、基因治疗的对象、方式及基因治疗的现状和前景作一个简单介绍 相似文献
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