人同源异型框Csx及其变体的克隆、在大肠杆菌中的表达及其DNA结合性能研究

人心脏同源异型框基因Csx是同源异型框基因家族NK2的成员之一，也是心脏早期发育必须的转录因子之一。虽然目前关于Csx基因在发育中的作用及其与先天性心脏病的关系得到了广泛的关注，并研究得较为深入，然而Csx本身的结构与功能的关系仍不十分清楚，Csx包含了3个保守的结构域：TN结构域、同源异型框结构域和NK2-SD结构域。通过选择合适的酶切位点，构建了Csx的5个变体，分别缺失了不同的结构域，并将Csx及这5个变体克隆到pFT32系列载体中，将这6个构建好的质粒转化E．coli BL21(EE3)，在IPTG的诱导下，得到了Csx基因及5个变体在大肠杆菌中的可溶性表达．凝胶阻滞实验显示：同源异型框是Gx与DNA相互作用的区域，缺失了同源异型框结构域，Csx就无法和靶序列结合．其它结构域的缺失对Csx和其靶DNA序列的结合影响不大。