应用原生质体融合技术选育L-异亮氨酸生产菌

以黄色短杆菌WY10和ASL495为亲本菌株，分别摸索了其原生质体形成和再生的条件，并在此基础上，进行了原生质体融合试验，考察了PEG浓度、融合时间等条件对原生质体融合的影响；最后利用所确定的条件对两亲株进行了融合，筛选出目的融合子WYA09和WYA17，带有双亲株标记Met^-和Leu^-。经产酸验证后，产酸量没有大幅提高，但副产氨基酸(主要是亮氨酸)减少，对工业生产中分离提纯工作和下一步的筛选高产菌工作都大有益处。     

产谷氨酸菌转导的研究

研究了一株 Brevibacterium tientsinenensT6-13 温和噬菌体φT4的转导。结果表明:φT4能够以10~(-7)左右的频率转导不同的营养缺陷标记;首次发现,L-色氨酸能够有效地提高转导频率,紫外线照射噬菌体对Thr和Cys基因的转导有相似的影响,即随着紫外线照射时间的延长,完全转导子出现的频率先上升而后下降;通过共转导的测定发现了T6-13的一个基因连锁群,基因顺序是 cys-thr-met。     

黄色短杆菌原生质体形成和再生条件研究

本文研究提高谷氨酸黄色短杆菌原生质体再生率的措施。按所研究的最适实验条件获得的再生率,比文献[1]报道的高150％,比文献[2]报道的高67％。     

柠檬酸钠对L–缬氨酸发酵及代谢流量分布的影响

以黄色短杆菌XV0505为供试菌,研究柠檬酸钠对L–缬氨酸发酵的影响,同时应用MATLAB软件和代谢流量分析方法,定量研究柠檬酸钠对L–缬氨酸发酵中后期胞内代谢流量分布的影响.结果表明,添加2.0 g/L柠檬酸钠可提高L–缬氨酸产量,同时不影响菌体生长.添加柠檬酸钠后,L–缬氨酸生物合成的代谢流从41.42增长至45.87,较未添加前提高了10.74%.合成副产物L–丙氨酸和HAc的代谢流明显减少,分别降低了21.10%和32.47%.因此,添加柠檬酸钠能够扰动L–缬氨酸生物合成途径关键节点代谢流量分布,有利于减少副产物的生成,提高L–缬氨酸生物合成途径的代谢流量.     

孤立型胸椎黄韧带骨化并椎管狭窄的诊治

研究孤立型胸椎黄韧带骨化（OLF）并椎管狭窄诊断与手术治疗的特点。采用回顾性研究方法对手术治疗的孤立型胸椎OLF病例进行总结分析。手术方法采用椎板间开窗减压术与椎管后壁切除减压术。按改良胸椎JOA评分，术前评分7—8分，平均7．7分。结果术后随访平均14．3个月，参照Epstein所定标准：优6例，良2例，改善1例。术后胸椎JOA评分8—11分，平均10．2分。孤立型OLF临床表现复杂，仔细查体结合CT、MRI检查是诊断OLF的重要手段。通过三维CT确定骨化部位，椎板间开窗减压术是治疗孤立型OLF并椎管狭窄的有效方法。     

黄色短杆菌中谷氨酸脱氢酶的分离纯化及特性

经硫酸铵盐析、DEAE-纤维素层析、苯-琼脂糖CL-4B(Phenyl-SepharoseOL-4B)层析和交联葡聚糖G-200(Sephadex G-200)层析等步骤从谷氨酸产生菌——黄色短杆菌中分离纯化的谷氨酸脱氢酶,酶活提高了230倍。该酶的分子量约为30万,由六个分子量约为5万的亚基组成,最适pH为8.9,并对热较稳定。在pH8.2时,以谷氨酸和NADP+为底物时的米氏常数值分别为0.294mol/L和0.1mmol/L。     

三相分离甾短杆菌胆固醇氧化酶及其性质

三相分离(TPP)是将硫酸铵与叔丁醇混合后形成有机相、中间沉淀相和水相。在20°C,调节发酵上清液的pH至6.0,加入硫酸铵使终浓度为400 g/L,溶解后加入与上清液等体积的叔丁醇,静置1 h分相,胆固醇氧化酶在有机相和水相之间形成蛋白沉淀,12 000 r/min离心10 min收集中间蛋白相,用pH 7.5,10 mmol/L的磷酸缓冲液溶解。结果表明:利用三相分离技术从乳化体系中分离纯化胆固醇氧化酶,比酶活提高了3.49倍,收率达93%。回收的酶液进一步经过DEAE-Sepharose Fast Flow纯化,比酶活从3.56 U/mg提高到30.15 U/mg。该酶最适反应温度为60°C,最适反应pH为7.5,酶的等电点为8.5,该酶在37°C,pH 6.0~8.0较为稳定。Hg2 和Ag 离子完全抑制胆固醇氧化酶的活性。     

黄色短杆菌ATCC14067生物合成L-谷氨酰胺的条件

本文报道黄色短菌(Brevibacterium flavum)ATCC 14067生物合成L-谷氨酰胺条件的研究结果。试验表明:培养基中的氮源种类,碳、氮浓度以及pH和通气量对L-谷氨酰胺的生物合成均有较大影响;所试金属离子亦有作用。在合适的培养条件下,该菌株可在发酵液中积累L-谷氨酰胺达26.83mg/ml。     

L—谷酰胺产生菌株的选育和发酵条件的研究

报道了Ｌ谷酰胺产生菌Ｂｃ－６６诱变育种及其摇瓶发酵条件研究的结果。以黄色短杆菌ＡＴＣＣ１４０６７为出发菌种,经逐级诱变处理,选育１株能高产Ｌ谷酰胺,副产物较少,且对磺胺胍具抗性的变异株Ｂｃ－６６。在适宜的培养条件下,摇瓶发酵７２ｈ,可积累谷酰胺达３１～３３ｍｇ·ｍＬ－１,且遗传稳定性较好。对该菌株的发酵条件作了较系统的试验,摸索出较以前简化的培养基,有利于今后的进一步研究。     

黄姜花中二芳基庚烷的分离鉴定

风干的黄姜花（Hedychium flavum）根茎粉碎后,用工业甲醇浸泡提取。提取物水溶后 用乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯萃取部分利用柱层析和HPLC等方法进行分离,经NMR等方法鉴定后, 得到4个二芳基庚烷类化合物,化合物分别为：1,7-bis（4-hydroxy-3-methoxyphenyl）heptane-3,5- diol （1）、5-hydroxy- 1-（4''-hydroxyphenyl）-7-（4''- hydroxy-3''-methoxyphenyl）-3-heptanone （2）、 gingerenone A （3）和coriandralpinin C （4）,均为首次从黄姜花中分离得到。