番茄CDT2同源基因RNA干涉载体的构建及遗传转化研究

真核生物CDT2是CUL4-DDB1 E3泛素复合体的组成部分,在细胞周期调控、DNA复制与损伤修复中起到重要作用.本研究克隆了番茄CDT2同源基因片段并构建了CDT2基因RNA干涉植物表达载体pBI121-CDT2-RNAi.通过根癌农杆菌介导转入番茄子叶,经组织培养成功获得转基因植株.半定量RT-PCR分析显示,转基因植株叶片内CDT2的表达量明显低于野生型植株.转基因植株叶片叶绿素含量比野生型明显升高.该研究结果揭示番茄CDT2基因的功能做出了新的尝试.     

水仙胚性愈伤的获得及农杆菌介导GUS基因的遗传转化

用正交实验设计对前期影响水仙胚性愈伤诱导和分化关联性大的因素进行综合分析,结果显示,培养基类型、激素及处理方式、不同添加物等对水仙外植体胚性愈伤诱导及分化的影响是基于培养基的多因素协同效应。水仙适宜胚性愈伤诱导培养基是:改良MB+NAA(0.2 mg/L)+6BA(2 mg/L)+ABA (2 mg/L)+AgNO3(5 mg/L);适宜的分化培养基是：改良N6+2,4D(0.5 mg/L)+6BA(2.5 mg/L)+NAA(0.2 mg/L)+ABA(2 mg/L)。实验中观察到水仙体细胞胚的发生,在胚性愈伤诱导和分化体系优化基础上实现农杆菌介导GUS基因转化,稳定表达抗性愈伤GUS染色显示最佳胚性愈伤诱导培养基能促进水仙外植体感受态的形成,有利于外源基因的接受,PCR检测表明实验中获得3株转GUS基因阳性植株。     

HAK基因对玉米的遗传转化及其耐盐性研究

摘要：用农杆菌介导法将高亲和性钾离子转运体基因（HAK）和Bar基因转入5个优良玉米自交系7922、P138、265、238和271中,并对影响其遗传转化效率因素进行了优化．经PCR和RT-PCR检测证实获得阳性植株．除草剂涂抹实验证明Bar基因已经整合进玉米基因组．用不同浓度的盐溶液处理转基因植株和对照植株,发现转基因植株叶片中的K＋含量、脯氨酸和叶绿素含量均高于未转化植株,而Na＋含量低于未转化植株,表明HAK基因已经整合进玉米基因组,并通过过量表达提高了植株的耐盐性．     

外源基因在转基因马铃薯植株中的异常表达

根癌农杆菌感染马铃薯叶盘伤口细胞并进行共培养转化，感染叶盘筛选培养基上可获得卡那霉象抗性的转化愈伤组织，并在转化细胞中检测到ＮＰＴⅡ酶活性，在两种分化培养基上转化愈伤组织的分化率分别为１７％和２０％，ＤＮＡ分子杂交证实以双向载体质粒ＰＰＺＨ１上的ｎｐｔⅡ基因和ｚｅｉｎ－ＨＥＡＡＥ融俣基因均已导入并整合到马铃薯再生植株基因组中，导入的外源基因引起了转基因气生块茎中氨基酸组分的变化，大多数氨基酸含量有     

Obtained transgenic wheat expressing pac1 mediated by Agrobacterium is resistant against Barley yellow dwarf virus-GPV

In fission yeast （Schizosaccharomyces pombe）, pacl gene was cloned with 99.3% nucleotide sequence similarity with published pacl in GenBank. In pET-5α expression system, the expression product of cloned pacl in E. coil showed activity to degrade the double-strand RNA. Harboring the binary vector pBI121, which contains pacl gene, Agrobacterium tumefaciens strain LBA4404 was used to transform the wheat immature embryos precultured 7-10 d. After preregeneration, regeneration and selection culture stage, totally 41 G418 resistant plants were obtained, in which 25 lines were proved to integrate with transgene and express transgene normally by PCR, Dot blot, RT-PCR and ELISA detection. Antivirus test carried out on 25 positive lines with high dose of Barley yellow dwarf virus-GPV revealed that 12 lines had resistance to BVDV-GPV in low level, another 12 lines had resistance to BVDV- GPV in middle level, and 1 line showed resistance to BVDV-GPV in high level. However, both low and middle level of resistance plants showed no symptoms when infected by viruses at low dose, which suggested the dose-dependent effect of the resistance mediated by pacl to BYDV-GPV.     

绿色荧光蛋白基因转化大岩桐的研究

利用农杆菌介导法 ,用含有绿色荧光蛋白基因的二元双价表达载体pBINm -gfp5 -ER转化大岩桐 ,并得到卡那霉素 (Kanamycin ,Kan)抗性再生植株 .对其进行初步PCR检测 ,结果表明 ,K2 0 0 (含Kan 2 0 0mg/L)培养基上的绿苗中有 3株PCR结果呈阳性 .对PCR阳性的植株进行了点杂交分析 ,均表现出较强的杂交信号 ,这说明外源基因已整合转入到大岩桐基因组中 .在荧光显微镜下观察转基因大岩桐 ,发现部分花、叶细胞均发出一定强度的绿色荧光     

运用农杆菌介导的瞬时表达体系研究PDS基因沉默

农杆菌介导的瞬时表达体系是一个研究整株植物基因沉默的快速实用系统.本文介绍了运用该系统研究马铃薯X病毒诱导烟草(Nicotiana benthamianan benthamiana)八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)基因的沉默问题.实验结果表明:携带有与PDS基因同源的409个碱基大小的cDNA片段的重组的马铃薯X病毒载体抑制了内源的PDS基因的表达.     

马铃薯StHb1蛋白的亚细胞定位

为了研究马铃薯StHb1蛋白的亚细胞定位情况,采用RT-PCR技术克隆到马铃薯StHb1基因cDNA序列,并成功构建了StHb1基因与绿色荧光蛋白基因的融合表达载体pBI121-StHb1-GFP.利用农杆菌介导法将重组载体转化洋葱内表皮细胞,通过荧光显微镜观察融合蛋白的瞬时表达以确定StHb1蛋白在细胞内的分布.结果表明StHb1蛋白主要分布于细胞核中.     

农杆菌介导转化豆科牧草百脉根影响因子

对农杆菌介导转化豆科牧草百脉根的相关影响因子进行了实验研究,结果表明:在百脉根农杆菌转化体系中,以农杆菌AGL1菌株、子叶转化受体、3 d共培养时间以及25 mg/L卡那霉素筛选质量浓度为最佳转化条件.研究还发现,头孢霉素对农杆菌AGL1菌株的抑制作用要强于羧苄霉素.     

水稻基因工程育种及其进展

总结了水稻基因工程育种的主要内容，介绍了其技术体系(特别是近年有关实验方法的改进)。及其研究进展。