不同试剂盒提取质粒中内毒素水平的比较

目的比较几种不同质粒提取试剂盒提取质粒中内毒素水平。方法选用6种市售商业化试剂盒:QIAGEN质粒小提试剂盒Plasmid Mini Kit(12123),QIAGNE无内毒素质粒大提试剂盒EndoFree PlasmidMaxi Kit(12362),康为世纪高纯质粒中提试剂盒(CW0502),A厂家无内毒素质粒中提试剂盒,B厂家无内毒素质粒小提试剂盒,C厂家无内毒素质粒小提试剂盒(BSC01S2D)。分别提取质粒DNA,应用鲎试剂显色基质法和凝胶法检测所提质粒中内毒素水平。结果6种试剂盒提取质粒得率、A260/A280及A260/A230值均较好,但内毒素水平各不相同,其中各厂家标明无内毒素试剂盒提取质粒中内毒素水平相对较低,QIAGEN无内毒素质料大提试剂盒提取的质粒中内毒素小于0. 125 EU/μg。结论6种质粒提取试剂盒使用时应根据实际情况进行选择。     

鲎血淋巴系统的特点及其功能

鲎的血淋巴系统由心脏、血管和血淋巴液组成．心脏和血管系统非常发达，而且血液量巨大．血淋巴液由血浆和血细胞组成．血浆主要含有血蓝蛋白、02—巨球蛋白、C—反应蛋白等．对鲎血细胞的种类，看法不一，其主要的血细胞类型为颗粒性血细胞，其胞质中含有特征性的大小颗粒．鲎的血淋巴中含有50种以上的免疫因子，大都位于大小颗粒中，它们在鲎的天然免疫中起重要的作用．     

中国鲎黄色结缔组织营养细胞超微结构观察

利用透射电镜对中国鲎营养细胞进行超微结构观察．营养细胞为鲎黄色结缔组织的主要构成细胞．营养细胞往往外包基膜，胞质中含有丰富的营养颗粒和脂肪颗粒．营养细胞由结缔组织中的营养母细胞分化而来．营养母细胞的细胞质膜特别发达。胞质少；原始营养细胞胞质增大许多，核质比变小。细胞器增多，特别是线粒体和内质网数量增多；随着营养细胞的发育，胞质中形成大量的营养颗粒和脂肪颗粒．营养颗粒和脂肪颗粒是鲎机体营养的储存库．营养颗粒被消化过程中。形成结构各异的残余体．     

鲎--全身是宝的海洋珍贵活化石

鲎亦称马蹄鲎(horseshoe crab)(图1)，属节肢动物门(Arthropoda)，肢口纲(Merostomata)，剑尾目(XiphosuHda)，鲎科(Limuroidea)。目前世界现存的鲎。根据其形态和分布特点，可分为二亚科三属四种。其中ia'mulinae亚科仅有美洲鲎属(Limulus)，美洲鲎(Limulus polyphemus)--种。分布于北美东海岸水域；而Tachypleinae亚科有两属，分布于亚洲东南岸及东岸沿海水域。其中东方鲎属(Tachypleus)有两种：东方鲎(Tachypleus tridentatus)(亦称三刺鲎、中国鲎或日本鲎)和南方鲎(Tachypleus gigas)(亦称巨鲎)：蝎鲎属(Carcinoscorpius)仅一种圆尾鲎(Carcinoscorpius rotundicauda)。     

盐酸克林霉素注射液细菌内毒素检查法的改进

按《中国药典》2015年版四部进行盐酸克林霉素注射液细菌内毒检查,发现盐酸克林霉素注射液对细菌内毒素与鲎试剂反应存在抑制干扰作用.用稀释剂Ⅰ代替BET水进行样品的稀释,干扰试验结果表明,样品在15倍以上稀释质量浓度时可排除干扰.对3批盐酸克林霉素注射液进行检查,结果均符合规定.所建立的细菌内毒素检查法可用于盐酸克林霉素注射液的细菌内毒素检查.     

复方泛影葡胺注射液细菌内毒素检查法研究

探讨采用鲎试剂法代替家兔法进行复方泛影葡胺注射液热原物质检查的可行性.根据临床最大给药剂量计算细菌内毒素限值,按《中国药典》2015年版四部进行实验和结果判断.实验结果表明复方泛影葡胺注射液稀释20倍时对细菌内毒素检查无干扰,细菌内毒素限值为1. 25 EU·m L-1.对3批复方泛影葡胺注射液进行常规检查,结果均符合规定.本项研究建立的复方泛影葡胺注射液细菌内毒素检查法可以替代原有的家兔热原检查法.     

利用毕赤酵母表达抗真菌鲎素基因

人工设计并合成了抗真菌鲎素基因ｔａｃ。将该基因克隆到酵母表达载体ｐＰＩＣ９上,使其准确融合了α交配因子分泌信号之后,电击转化毕赤酵母宿主菌ＧＳ１１５／Ｈｉｓ＾－,筛选出的转化子用甲醇作诱导物在３０℃进行诱导后,分泌到培养基中的表达产物能够抑制稻瘟病菌孢子的萌发,ｔａｃ基因以单拷贝整合到毕赤酵母染色体基因组中并有转录产物ｍＲＮＡ的存在。     

美洲鲎miRNA的生物信息学挖掘与分析

利用miRBase数据库中已有动物的小RNA（miRNA）,通过生物信息学方法对美洲鲎(Limulus polyphemus)表达序列标签（Expressed Sequences Tag,EST）和cDNA进行序列比对,挖掘美洲鲎miRNA,得到了 72个miRNA前体(pre-miRNA)、49个可编码成熟miRNA,隶属于40个miRNA家族。miRNA家族归类结果表明,无论在低等脊椎动物还是高等动物中,miRNA家族的存在都是相当保守的。以miR-10基因前体为例,分析其序列与其他物种同源序列的差异,显示miRNA序列的高度保守性。miR-10前体序列分析系统进化发现,物种聚类与传统分类亲缘关系一致。     

鲎保育的三赢策略

鲎有活化石之称,不仅是古生物学的重要研究对象,亦是医药试剂的原料,保育鲎不仅维系了人类生存,更是促进人类文明的跃升。但近年来,鲎被人类大量捕食、采血及破坏栖息地,种群大规模下降,迫切需要得到保育。根据世界自然保护联盟(IUCN)指南,鲎的物种保育工作以划设鲎保护区、增加鲎的种群量以及促进大众参与保育为重点。研究结果显示:在中国南部沿海,中国鲎(Tachypleus tridentatus)与圆尾鲎(Carcinoscorpius rotundicauda)的稚鲎共同栖息在有红树林分布的河口,这两种鲎的食物中大约60%的碳源来自海草衍生的食物;在户外养殖条件下,稚鲎与方斑东凤螺(Babylonia areolata)混养能够加速稚鲎脱壳率并提高存活率,因而可以获得大量适合放流的稚鲎(3龄)。本文在现有的研究成果基础上提出鲎保育的三赢策略:支持有效的海岸及河口保护区经营管理,在保护区内维系鲎的种群,对大众与小区进行鲎资源的明智利用宣教。     

显色基质法定量测定质粒DNA中的细菌内毒素

探讨使用显色基质法定量测定质粒DNA中细菌内毒素含量的可行性。结果表明,质粒DNA溶液经2倍稀释,对内毒素检测不存在干扰作用,用显色基质法可以定量测定质粒DNA中内毒素含量。显色基质法与家兔热源法比较,有敏捷、快速、定量、稳定可行的优点,其测定结果同家兔热源法结果一致。