核酶的化学合成及其对烟草花叶病毒RNA片段的体外剪切

设计并用化学方法合成了针对烟草花叶病毒ＲＮＡ的核酶ＲＺ－１及ＲＺ－１小型化的核酶ＲＺ－２以及它们的底物ＲＮＡ片段Ｓｂ,研究了两种核酶对底物Ｓｂ的体外催化活性,并把核酶Ｒｚ－１与生物合成的相同组成的核酶Ｒｚ－１’进行了比较试验。     

利用重组自交系群体进行抗玉米矮花叶病研究

玉米矮花叶病在世界范围内广泛分布，且危害十分严重．因此正确认识玉米（Zea mays L．）对矮花叶病的抗性机制非常必要．基于此，本研究利用遗传差异较大的Mo17（高感玉米矮花叶病）和黄早四（高抗玉米矮花叶病）为亲本采用一粒传法构建了F9代重组自交系（Recombinant inbred line，RIL）分离群体，共256系．通过人工接甘蔗花叶病毒MDB株系（Sugarcane mosaic virus strain MDB, SCMV-MDB）对该分离群体进行了抗病性分析，统计了发病率和病情指数两项指标，根据这两项指标的频数分布图可知：玉米对矮花叶病的抗性主要由主基因控制，但不能排除还有微效基因的可能性．     

苜蓿花叶病毒RNA23''''端cDNA转基因烟草的研究

将克隆的苜蓿花叶病毒中国分离株(AIMV—Ch)RNA23′端cDNA重组到植物表达载体pROKⅡ中，用三亲融合法导入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404，采用叶圆片法转化普通烟草，诱导再生小植株．经卡那霉素抗性筛选和PCR检测，证明AIMV RNA23′端基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中．     

一个特殊的顺式发夹核酶对感染烟草原生质体的影响

研究一个烟草花叶病毒(TMV)cDNA3′末端被特异切割的发夹核酶对感染原生质体的作用。选用一个外源基因绿色水母荧光蛋白(GFPuv)作为报道基因，取代了大部分的CP编码区域，以研究在烟草原生质体中发夹核酶对TMV载体的复制，通过GFP的表达来确定表达量。顺式发夹核酶对TMV载体感染效率的影响通过体外转录来观察。TMV GFPRIB体外转录感染原生质体的效率比与其不含该核酶的对应物的感染效率高3～5倍。Northern杂交结果表明，包括核酶在内的3’末端非病毒序列在体外转录反应开始后就被顺式发夹核酶切除了。当直接用载体DNA pSTMVGFPRIB感染原生质体时，感染原生质体的数量比与之相对应的pSTMVGFP NOS感染原生质体数多50％～80％。     

核酸分子杂交检测黄瓜花叶病毒

为检测黄瓜花叶病毒的存在,应用Northernblot,将提取的黄瓜花叶病毒RNA样品,经甲醛变性凝胶电泳分离,使RNA解离成单链,然后用上行毛细管转移法,将凝胶上的单链RNA片段转移到尼龙膜上.经适当洗涤、干燥后,在烤箱中80℃保温2h,用于杂交.以带有黄瓜花叶病毒目的片段的细菌质粒制备DNA探针,用放射性同位素32P标记探针DNA,100℃变性处理用于杂交的探针,然后进行杂交.结果表明,在杂交膜上显示与特异性探针结合的阳性RNA条带,检测到了黄瓜花叶病毒的存在.     

草酸可诱导甜瓜对WMV-2的系统抗性

以草酸处理对西瓜花叶病毒２（ｗａｔｅｍｅｌｏｎｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ－２,ＷＭＶ－２）敏感的甜瓜品种“网纹香”,可以显著提高该品种甜瓜对ＷＭＶ－２的系统抗性,挑战接种证明,草酸处理株的感病症状显著轻于对照植株,病毒含量仅为对照植株的４％,草酸处理植株的过氧化物酶活力为对照植株的６倍,并且诱导出３种新的过氧化物酶同工酶,木质素的含量亦提高８２．９％,证明草酸在诱导甜瓜过氧化物酶的同时,诱导了甜瓜对Ｗ     

与SMV抗性基因Rsa连锁的一个共显性SCAR标记

将ＲＡＰＤ标记转换为ＳＣＡＲ标记是更到更为可靠而有有标记的有效方法，应用集群分离体分析（ＢＳＡ）方法，筛选了９００个１００个碱基随机引物，得到了２个与单显性大豆花叶病毒抗性基因Ｒｓａ连锁的显性ＲＡＰＤ标记ＯＰＡＳ－０６１８００和ＯＰＷ－０５６００，将与Ｒｓａ连锁距离较近的ＯＰＷ－０５６６０克隆并测定ＤＮＡ序列，根据这个序列的两端设计了１对特异的寡聚核苷酸引物，用这对引物进行扩增，在抗感亲本间观察到     

黄瓜花叶病毒复制酶基因的克隆及其植物表达载体的构建

黄瓜花叶病毒(CMV)是一种正链RNA病毒,在全世界分布很广,至少可侵染85科365属中的757种植物.将经过改造的CMV复制酶基因导入植物,可获得比导入外壳蛋白基因等抗性水平高、时间长的工程植株.本文首次报道了中国株系CMV复制酶基因的克隆及其核苷酸序列,构建了3’末端不同长度缺失的植物表达载体.     

大豆花叶病毒及其抗性研究

大豆花叶病毒病（soybean mosaic virus,SMV）是大豆主要病害之一。随着大豆花叶病毒的病害日益严重,通常特定大豆品种只对部分SMV株系产生抗性,对SMV抗性的研究受到育种家们的高度关注。     

一种快速检测植物病毒RNA蓄积量的竞争PCR方法

用Oligo6.6软件在pUC18上设计1对比目的基因多100～200 bp的内参引物,摸索了目的基因和内参共同扩增的竞争PCR反应条件,测定了嘧肽霉素处理对烟草组织中烟草花叶病毒RNA相对含量的影响,同时用间接ELISA方法验证了该方法.试验结果表明:竞争PCR的方法能够快速、相对准确的测定植物组织中病毒RNA蓄积量的变化情况.