免疫组织化学染色过程中出现问题及对策

免疫组织化学法由最初的直接免疫荧光标记法,逐渐发展出现了多种方法。其敏感性和特异性不断得到提高,该方法具有技术统一,定性可靠,定位精确和定量准确等优点,但由于其步骤繁多,影响因素众多。本文列举了在该技术应用过程中存在的一些常见问题,并分析其中可能的原因。实验者应系统地分析和查找染色过程中原因,以便找到有效的解决方法,更要严格操作步骤,减少人为失误造成的干扰。     

链佐菌素对大鼠胰岛损伤的病理形态免疫组化研究

应用胰岛素,胰高血糖素和生长抑素抗血清,通过免疫组化染色对正常（对照组）和ＳＴＺ诱导的糖尿病大鼠（实验组）胰岛的病理形态进行了观察。结果显示：实验组胰岛Ｂ细胞发生明显变性坏死,对照组与实验组表达胰岛素呈阳性的胰岛分别为９２．４％,２３．３％,二者之间的显著性差异（Ｐ〈０．００１）,实验线胰岛素的表达胰岛胞具有直接损伤作用,Ａ细胞的增生可能与ＳＴＺ有关,并参与升高血糖和胰岛素含量降低效应。     

啤酒对胃粘膜下神经丛影响的酶组织化学研究

目的:探讨啤酒对胃粘膜下神经丛神经元功能的影响。方法:以小白鼠作为实验对象,用20只刚断乳昆明种(清洁级)小鼠随机分为两组,A组(10只)饲以标准饲料,强制以啤酒为饮料,B组(10只)饲以标准饲料,自由饮自来水,经2周喂养后处死,取小鼠胃体部胃壁做SDH、LDH酶组织化学检测。结果:(1)A、B组小鼠胃壁均无明显组织学损害。(2)A组粘膜下神经丛SDH强阳性(+++)者占总数的52.1％,阳性(++)者占47.9％;B组粘膜下神经丛SDH强阳性(+++)者占总数的78.1％,阳性(++)者占21.9％;(3)A组粘膜下神经丛LDH强阳性(+++)者为零,阳性(++)者为100％;B组粘膜下神经丛LDH强阳性(+++)者占总数的20％,阳性(++)者占80％;结论:长期饮用啤酒,A组小鼠胃壁组织结构与B组对比,无明显组织学损害;A组小鼠胃壁粘膜下神经丛神经元的有氧代谢和无氧酵解较B组有所减弱,显示其增加胃粘膜肌层活动及降低胃腺分泌功能。     

不同动物小肠肌间神经丛内NOS神经元分布的比较

采用NADPH-黄递酶组织化学法对草鱼、牛蛙、家鸡和大鼠小肠肌间神经丛内NOS阳性神经元的分布进行了比较研究．结果表明，NOS阳性产物在草鱼肌间神经丛中未见分布，而在其它几类动物中阳性反应明显．但在不同动物NOS阳性神经元的形态、分布、密度及神经纤维的分布存在差异．在牛蛙、家鸡和大鼠的小肠肌间神经丛中，NOS阳性神经元的分布从分散到集中，形态呈现由不规则形到规则形再到不规则形的复杂变化；神经节从无到有，神经网络由不发达趋于发达；而在每种动物中，NOS阳性神经元的密度沿肠道由前向后基本呈上升趋势，这种节段性的差异牛蛙极显著，家鸡和大鼠则不甚显著．实验结果提示，随着动物的进化，一氧化氮能神经元在肠肌间神经丛中的分布也更加复杂而有序，从而使胃肠道的调节更加精确．     

TGF-β1/Smads细胞因子在硬皮病皮肤组织上的表达研究

应用免疫组织化学SP法测定38例硬皮病患者活检皮肤组织和10例正常活检皮肤组织TGF-β1、Smad/3、Smad4、Smad7表达含量,并结合病例临床资料加以分析.实验结果表明,硬皮病患者组活检皮肤组织的TGF-β1、Smad2/3、Smad4表达量显著高于正常皮肤对照组;硬皮病患者组活检皮肤组织的Smad7表达量低于正常对照;在硬皮病患者组内活检皮肤组织TGF-β1、Smad2/3、Smad4和Smad7表达量与患者病情分类、分期、合并有无其他结缔组织疾病没有差异.提示TGF-β1/Smads信号传导     

C-met和COX-2在非小细胞肺癌中的表达与临床意义

目的探讨非小细胞肺癌中C-met和COX-2表达及其临床意义。方法收集2010年1月至2012年6月存档的NSCLC石蜡标本60例肺癌组织和20例相对应癌旁正常肺组织。采用免疫组化方法分别检测肺癌组织及癌旁正常肺组织中C-met和COX-2的表达情况。结果 C-met和COX-2在NSCLC中的表达显著高于癌旁正常组织;C-met和COX-2在NSCLC中的过表达和病理类型、有无淋巴结结转移以及TNM分期有密切相关性;C-met还与病理分级相关;C-met和COX-2两者在NSCLC中的表达呈正相关性。结论 C-met和COX-2可能在NSCLC的发生、发展过程中起了重要的作用,C-met和COX-2可能成为肺癌早期诊断、预后评估的生物标志物。两者的显著相关性提示C-met和COX-2两者在NSCLC的发生、发展中存在相互作用,为探讨非小细胞肺癌发病机制以及探寻非小细胞肺癌治疗新途径提供实验依据。     

新疆卡波氏肉瘤中c-myc、14-3-3β的表达

为探讨原癌基因c-myc、14-3-3β在新疆卡波氏肉瘤中的表达及意义,应用免疫组织化学Envision二步法检测新疆14例卡波氏肉瘤及对照组12例健康人正常皮肤组织内c-myc,14-3-3β的表达水平,结果显示：卡波氏肉瘤组织c-myc、14-3-3β蛋白均呈胞浆阳性,所有病例均呈阳性表达（14/14）,阳性率均为100%;c-myc蛋白在正常皮肤组织中多数病例呈阴性表达（3/12）,阳性率为25%,14-3-3β蛋白在正常皮肤组织中多数病例呈阴性表达（2/12）,阳性率为16.7%,c-myc、14-3-3β蛋白在KS中的表达明显高于在正常皮肤组织中的表达,差异均有统计学意义（P〈0.01）。表明：c-myc1、4-3-3β蛋白的异常表达在KS的发展过程中可能发挥了重要作用。     

己烯雌酚对小鼠子宫内膜层粘连蛋白表达的影响

研究己烯雌酚 (DES)影响下小鼠子宫内膜层粘连蛋白 (LN)的表达变化 .2 6只雌性昆明小鼠随机分为三组 :未孕对照组 ,小剂量 (0 .2 8μgDES /g体重 )注射组 ,大剂量 (1.1μgDES /g体重 )注射组 .用免疫组化SP法和图像分析技术进行LN定位、定量测定 .正常小鼠子宫内膜LN在上皮基膜、血管内皮基膜均有表达 .注射己烯雌酚后 ,LN表达部位基本不变 ,表达量有明显增加 (P <0 .0 5 ) ,并随己烯雌酚剂量增加而增强 (P <0 .0 5 ) .通过影响LN的表达 ,可能是雌激素调控胚泡着床的机理之一 .     

成年雄性斑胸草雀脑多巴胺D1受体的分布

多巴胺是脑内关键的神经递质,它通过与多巴胺受体的作用及其下游的一系列反应来影响基因表达、神经调节和行为活动.在成年鸣禽中,中脑多巴胺能神经元投射到X区、HVC和RA等鸣唱相关核团,释放多巴胺的量受一定社会情境的影响,从而表现出directed song和undirected song等不同鸣唱行为.获得斑胸草雀脑中多巴胺受体的表达情况,为与社会情境有关的鸣唱行为及其他和多巴胺相关的行为活动的神经机制探究提供了基础,并可促进行为学、电生理等方面的研究.我们发现D1受体在斑胸草雀脑中的分布与其mRNA的分布基本一致:在脑的绝大部分区域都有分布;主要鸣唱核团HVC和RA有表达,与其周围区域差异不明显;LMAN中表达量较少;DLM中的表达量较高,并与其周围区域差异明显.但是纹状体内的表达与其周围区域的差异性没有mRNA明显;GCT中的表达量较多,与周围区域差异明显.     

甲状腺冰对蜡块与冰剩蜡块免疫组织化学染色效果比较

目的通过对甲状腺冰对蜡块与冰剩蜡块免疫组织化学染色效果进行对照观察．发现冰对蜡块与冰剩蜡块对免疫组织化学染包效果的差异，为选择冰对蜡块与冰剩蜡块做免疫组织化学提供理论实践依据。方法3冰对蜡块与冰剩蜡块分别切片用EnVision法做TTF-1，CK19，Gal—3，HBME—1．TPO,TG免疫组织化学染色。结果对TTF—1．CK19．Gal-3，HBME-1，TPO，TG免疫组织化学染色结果的背景．定位进行分析．冰对蜡块与冰剩蜡块免疫组织化学染色各项指标阳性率完全一致。结论冰对蜡块与冰剩蜡块分别做免疫组织化学染色结果无明显差别．在没有冰剩蜡块或冰剩蜡块不符合要求时选择冰对蜡块做免坡组化．结果对诊断无影响。