诱导促进中国红豆杉细胞培养中紫杉烷的积累

通过甲苯莉酮酸酯（MJA）或二氢甲基苯莉酮酸酯（HMJA）的诱导，有效增强了中国红豆杉（Taxus chinensis）悬浮细胞培养中新型生理活性物质云南紫杉烷（taxuyunnanine C,Tc）的积累。在培养第7天添加500μmol/L MJA后，产物的胞内最大含量为每克干细胞含29.5ng Tc，但细胞生长受到明显抑制；在添加100μmol/LMJA时，Tc的总产量达最大，为300mg/L。紫杉烷生物合成途径中的关键酶紫杉二烯合成酶的活力在被诱导后也获得大幅度提高。     

中国红豆杉悬浮细胞高密度培养

采用３０ｇ／Ｌ起始糖浓度,通过在细胞对数生长后期补料的方法成功地在２５０ｍＬ摇瓶和１．５Ｌ搅拌式生物反应器中进行了细胞高密度培养,经２０ｄ培养,细胞干重超过２５ｇ／Ｌ。在反应器培养中,次生代谢产物紫杉烷的产量较低。通过高密度培养,明显增加了细胞量,还可以提高反应器中紫杉烷的产量。     

红豆杉抗癌有效成分的研究

利用藏产红豆杉（ Ｔａｘｕｓ Ｗａｌｌｉｃｈｉａｎｓ Ｚｕｃｃ） 的小枝叶,经粉碎,用有机溶剂提取,提取物进行极性溶剂的梯度萃取,色谱柱分离,分段洗脱收集,将各收集部位分别结晶,得两个结晶物。将结晶物经理化检测,光谱分析鉴定,其结构为Ｉ（ＢａｃｃａＴｉｎ） 和Ⅱ（Ｃｅｐｈｉｏｍａｎｉｎｅ） 。经活性实验研究,它们均有较强的抗癌作用。     

增强大肠杆菌MEP2通路发酵生产抗癌药物紫杉醇前体

用合成生物学的方法构建模块,使大肠杆菌遗传背景发生改变,生产红豆杉次生代谢产物紫杉醇前体物质——4(5),11(12)紫杉二烯(Taxadiene)。首先,用基因工程操作手段构建MEP2(2-C-Methyl-D-Erythritol-4-Phosphate,2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸途径)模块,这个模块包括4个基因:ispC、ispE、ispH和ispG,4个基因的表达产物属于大肠杆菌固有途径中的几个酶蛋白;模块构建好后,通过电穿孔的方式把MEP2转化到已含有上游MEP1模块和下游TG模块的大肠杆菌中,改变大肠杆菌固有的遗传信息。再用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导所转入基因的表达,最后用气相色谱-质谱(GC-MS)方法检测表达情况。成功构建MEP2模块;通过与MEP1模块和TG模块的组合实验,MEP2模块能加强菌株表达紫杉二烯。结果表明,微生物大肠杆菌可以通过基因工程改造手段来生产植物天然药物紫杉醇前体物质4(5),11(12)紫杉二烯以及其他中间体。     

紫杉插穗中生根抑制物的鉴定

利用生物和有机方法对紫杉（Ｔａｘｕｓ ｃｕｓｐｉｄａｔａ）插穗内生根抑制物进行了分析鉴定,结果表明,插穗中生根抑制物主要是酚类,它在韧皮部含量最多,其次是针叶,木质部很少。不同技龄的插重酚类物质含量不同,１ａ生插穗中含量最高,３ａ生含量最少。从树冠不同部位剪取的穗条酚类物质含量也不同：阳面技条含量高于阴面,树冠下部高于上部。扦插试验进一步验证了生物和有机鉴定结果。在紫杉扦插时,以３ａ生树冠上部阴面     

紫杉烷类PEG-PDLLA纳米粒的制备及其体外评价

采用乳化-溶剂蒸发法制备紫杉烷类PEG-PDLLA纳米粒,马尔文激光粒度仪测其粒径及Zeta电位;HPLC法测定纳米粒包封率和载药量;研究载药纳米粒在PBS中的释放动力学;初步评价载药纳米粒在MGC803、HeLa细胞中的摄取及细胞毒性。结果表明,通过包载形成的纳米粒的粒径为(13±1)nm,分布较集中。载体与药物的质量比在20∶1时,紫杉醇的均一性最好,卡巴他赛的包封率最高,达到88.77%。载药纳米粒具有较好的缓释作用,MGC803、HeLa细胞的存活率降低,与临床用注射剂效果相近。紫杉烷类PEG-PDLLA纳米粒的性质、释放、细胞抑瘤率都较好,可为开发紫杉烷类新型静脉注射制剂提供实验依据。     

土壤类型与酸碱度对紫杉生长发育的影响

为了探讨土壤类型与酸碱度对紫杉生长发育的影响,选择沙壤土、旱田土、腐殖土、河沙和苔藓等5种土壤类型(沙壤土pH分别为4.5,5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5,8.5)进行盆栽试验.结果表明:不同类型土壤对紫杉生长影响不同,在腐殖质中高生长最好,新梢长度达16.9 cm;其次是沙壤土,新梢长度达14.5 cm;在腐殖土和沙壤土中栽培的紫杉总根长度较大,河沙与苔藓基质中侧根和白根数量多.盆土酸碱度影响紫杉生长,土壤pH在5.5~7.0时,树高生长量差异不大,新梢长度为12.6~13.3 cm;当土壤pH小于4.5或大于7.5时,高生长受到抑制;土壤pH在5.5~7.0时,总根长度和侧根数量最多.     

紫杉细胞生长过程与营养物质消耗的动态研究

对紫杉 B10细胞系进行悬浮培养 ,并对其生长过程与营养物质的消耗过程进行了测定。结果显示 :紫衫细胞在改良 B5培养基中 ,对于碳源、硝态氮、磷以及钙、镁、钾等营养物质的消耗并不是均匀的 ,虽然培养液中的碳源和钙可以满足细胞生长速度的需要 ,但氮、磷、钾在细胞快速生长前期已经被消耗殆尽 ,后期开始出现镁离子含量不足。因此可以证明培养液中的氮、磷、钾含量不足是影响细胞快速增殖的主要因素     

紫杉宁5-肉桂酰基选择性水解反应研究

利用盐酸羟胺与紫杉宁侧链肉桂酰基上的双键能够发生的加成反应 ,进行 5 -位肉桂酰基选择性水解 ,研究了生成物的结构和得率 ,确定了该反应的较佳反应条件为紫杉宁、盐酸羟胺以及醋酸钠的摩尔比为 1 5 1 0 .