利用中国春小麦Ph突变体为太谷核不育小麦籽粒附加蓝色标记性状的研究

本文研究的目的是对太谷核不育小麦籽粒进行颜色标记,以便进一步利用太谷核不育小麦。以蓝粒小麦4D-4E二体异代换系作为标记性状供体,利用中国春小麦Ph突变体诱导部分同源染色体联会,增加同祖染色体间的交换,使4D染色体上的Tal基因与4E染色体上的蓝胚乳基因连锁,在本实验杂交组合[(Taltal×phph)×蓝粒小麦]×phph~2F_3中得到一个蓝粒高不育穗行,经分析与继代观察,初步认为这一穗行为4E带有蓝胚乳基因的染色体片段转移到4D染色体上使蓝胚乳基因与Tal基因发生不完全连锁。同时对Ph突变体诱导部分同源染色体联会的作用等问题进行了探讨。     

工程设计方案的选择法

本文依据灰色理论，提出了一种定性与定量结构，以定量分析为主的工程设计方案评估选择法，该法通用性强，可以把评估者的分散信息归纳为确切的评价值，具有吸收各类信息作出高层次数系统综合的优点。     

水稻苯达松敏感致死基因的RAPD标记的克隆及测序

用3S Spin DNA Agarose Gel Purification Kit试剂盒将与水稻苯达松敏感致死基因相连锁的RAPD遗传标记S20—420和S316—600回收纯化，连接于pGEM—T载体并克隆测序，得到了S20—420和S316—600的全序列，其长度分别为423bp、606bp．将两端序列设计特异PCR扩增引物可用于检测水稻苯达松敏感致死基因和标记辅助育种．     

基于荧光标记双向筛选的拟南芥CRISPR基因编辑突变体库构建

突变体库是研究基因功能的重要工具。拟南芥种质资源库(ABRC)储藏了几乎涵盖所有基因的突变体材料,其中T-DNA插入突变体占绝大多数。然而,当在T-DNA插入突变体中进行遗传转化或与其他转基因报告系统进行杂交时容易引起转基因沉默,阻碍了相关研究的开展,甚至产生错误结论。甲基磺酸乙酯(Ethyl Methane Sulfonate, EMS)诱变和快中子诱变技术可获得非转基因突变体,但这两种方法均为随机诱变技术,需要通过基因定位来确认突变位点,无法实现基因靶向敲除。CRISPR/Cas9可以对目的基因进行靶向编辑,获得不携带转基因的突变体。拟南芥中尚无利用CRISPR/Cas9进行高通量突变体库构建的报道。本研究共设计900条sgRNAs靶向300个RNA通路相关基因,通过合成sgRNA混池文库、引入DsRed2荧光筛选标记、将DNA条形码和二代测序技术相结合,实现了对转基因阳性苗的高通量鉴定和分型,并对T2代具有发育缺陷的无荧光植株进行负向筛选,成功鉴定到了不含转基因的smd3-b和rlua4突变体。     

聋鸟模型的制作

鸟是自然界除人类之外最具复杂发声行为的动物，鸟类语言与人类语言在很多方面都有相似之处，尤其是发声学习的听觉反馈，聋鸟模型的制作可以为其研究鸟类的发声与听觉反馈的关系提供理想的动物模型，本文采用链霉素肌肉注射的方法对鸟进行了致聋试验，结果发现肌肉注射链霉素每日60mg／kg以下为鸟的安全剂量，每日90mg／kg-210mg／kg为鸟的有毒剂量，每日240mg／kg以上为鸟的致死剂量，为聋鸟模型的制作摸索出了一套有效的方法。     

基于灰色聚类的水质评价方法

在论述灰色聚类方法原理的基础上，以东江河源段水质评价为实例，探讨了灰色聚类法在水质评价中的应用．     

水稻基因组DNA的RAPD扩增研究

通过对水稻RAPD反应条件比较研究，建立了对除草剂敏感致死水稻RAPD的最适反应体系和反应扩增程序，即在25止反应体系中，含10mmol／LTris-HCl(pH8．0)，10mmol／LKCI，8mmol／L(NH4)2804，0．05％NP-40，2．0mmol／LMgCl2，0．1mmol／L(each)dTNPs，20ng引物，20ng基因组DNA，1．5U的Taq酶。反应扩增程序为：94℃变性2min；扩增40个循环，每循环包括：94℃变性10s，40℃退火30s，72℃延伸1．5min；最终延伸5min。     

缺失Cys45—Cys50二硫键的三种突变体凝乳酶原复性的比较研究

通过对（Ｃｙｓ－Ａｓｐ）４５／（Ｃｙｓ－Ｓｅｒ）５０，（Ｃｙｓ－Ａｓｐ）４５和（Ｃｙｓ－Ｓｅｒ）５０３种突变体凝乳酶原复性的比较研究，发现：１．３种突变体凝乳酶原多肽链复性的条件基本一致。（２）ＰＤＩ能有效地促进３种突变体凝乳酶原的复性；３．３种突变体凝乳酶原的活化条件一致；４．单突变体凝乳酶原多肽链正确折叠的效率低于双突变体。基于上述结果，我们认为，Ｃｙｘ４５－Ｃｙｓ５０二硫键的形成有利于凝乳酶     

灰色统计方法在油田注水中的应用

利用灰色系统理论中的灰色统计方法,针对文南油田W33断块一些注水井的数据,确定了相应的灰类;通过对白化函数及灰数的计算,得到了该区块灰色决策矩阵,从而得到了该区块灰类的量化特征。所得结果可为油田决策者采取进一步的措施提供一定的理论根据。     

分泌性表达人rPA毕赤酵母工程菌株的构建及发酵条件的初步优化

通过PCR扩增得到组织型纤溶酶原激活剂突变体Reteplase(rPA)基因片断，将该基因片断插入到含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列载体pPIC9K中，构建了重组表达质粒pPICgK／rPA，转化Pichia pastoris GS115宿主菌．通过比较转化子在MM和MD平板上的生长状况，筛选His^ Mut^s表型转化子．并在2．0mg/mL G418平板筛选得到多拷贝转化子GR10，GR11．摇瓶培养，甲醇诱导外源基因表达，表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析，结果表明重组蛋白分子量约39ku，能与特异性单克隆抗体发生免疫反应；体外气泡法测定rPA活性，结果显示重组蛋白具有较好的纤溶活性．通过正交试验，优化发酵条件，表达活性最高为1050IU／mL．