浅谈癌胚抗原及其检测方法

癌胚抗原是一种肿瘤标志物,正常情况下,健康成人血清中癌胚抗原的平均含量小于5 ng/mL,如果远超这个水平,则体内可能有肿瘤存在。文章以人血清中的癌胚抗原检测为主题,阐明了癌症和癌胚抗原间的关系,指出癌胚抗原在癌症患者体内的分布和相关的检测方法,并提出采用血清作为检测癌胚抗原的待测物,以及检测癌胚抗原对预防和治疗癌症的意义。综合传统的癌胚抗原检测方法如荧光免疫分析法、放射性免疫分析法、酶联免疫吸附法,以及近期的电化学发光法、电化学免疫检测法和新兴的光电化学检测法,总结各种检测方法的检测原理、检测优缺点,以进一步提高检测癌胚抗原的灵敏性和特异性,以及为今后检测癌胚抗原提供新的思路。     

抗癌胚抗原纳米抗体与人Fc融合蛋白在毕赤酵母和HEK293细胞中的表达、纯化和性质比较

通过对不同系统表达的肿瘤标记物癌胚抗原(CEA)纳米抗体与人Fc融合蛋白(11C12-Fc)的表达、纯化及抗体性质等的比较分析,比较不同表达系统的特点及其对融合抗体性质的影响;从而为CEA融合纳米抗体在体内检测方面的应用提供理论依据。构建两种11C12-Fc表达系统(Pichia pastoris和HEK293)相应的表达载体和菌株,分别进行诱导表达、分离纯化;并对其纯化产物的生物学活性等进行初步研究。成功构建了毕赤酵母、HEK293细胞两种CEA纳米抗体融合蛋白(11C12-Fc)表达系统并实现11C12-Fc的胞外分泌表达;通过protein A柱及阴离子交换层析纯化,获得了较高纯度和浓度的11C12-Fc样品;通过突变糖基化位点的方式有效去除了毕赤酵母表达11C12的过度糖基化作用;并且其抗体亲和力较突变前未发生明显改变,与HEK293细胞表达的11C12-Fc都表现出较高的亲和力。毕赤酵母和HEK293系统均能够表达具有较高生物活性的11C12-Fc,后续的科研或生产可根据实际需要和条件来合理选择表达系统。为后续的纳米抗体融合蛋白规模化生产、体内诊断与靶向治疗的应用提供了理论和技术参考。     

胸水和血清CEA、ADA联合检测对恶性和结核性胸腔积液的诊断价值

目的 探讨联合检测胸腔积液血清中癌胚抗原（CEA）和腺苷脱氨酶(ADA)在恶性和结核性胸腔积液中的诊断价值.方法 对48例恶性胸腔积液和156例结核性胸腔积液的胸腔积液和血清ADA、CEA进行定量分析.结果 恶性胸腔积液和血清组癌胚抗原（CEA）明显高于结核性胸腔积液和血清组水平（P<0.01）;结核性胸腔积液和血清组腺苷脱氨酶(ＡＤＡ)明显高于恶性胸腔积液和血清组水平（P<0.01）;CEA在结核性和恶性胸腔积液中的阳性率分别为5.22%和86.36%,特异性13.64%和94.78％,ADA在结核性和癌性胸腔积液中分的阳性率分别为67.95％和6.25％,特异性93.75%和32.05％.结论　胸腔积液和血清ADA、CEA检测对恶性和结核胸腔积液均具有诊断与鉴别诊断价值.     

癌胚抗原对直结肠偶发高代谢灶良恶性判断

探讨肿瘤标记物癌胚抗原(CEA)测定对~(18)F-FDG PET/CT发现直结肠FDG局灶性高代谢灶癌变判断的临床价值。回顾性分析56例意外探测到结直肠局灶性高摄取灶病例,同时行血清CEA测定,将肠镜及病理结果作为标准分组。各组血清CEA水平数据汇总后行单因素方差分析及计算血清CEA水平测定的诊断效率。结果表明:56例结肠局灶性高代谢病灶中,结肠镜及病理检查出结肠癌及腺瘤共43例,阳性预测值(PPV)为76.8%;其中直结肠癌26例,腺瘤17例,其余13例(23.2%)为炎性及生理性改变。结肠癌组、腺瘤组及良性病变组(炎性和生理性摄取)的血清CEA水平分别为(15.0±17.1)μg/mL,(2.23±0.96)μg/mL,(2.51±0.90)μg/mL,恶性病变组与腺瘤组及正常组之间具有显著性差异,F=8.277,P=0.001。结肠癌组与癌前病变组及生理及炎性组之间P值分别为0.001和0.001。血清CEA水平探测局灶性浓聚灶结肠癌变的敏感性、特异性和准确率分别为:84.6%、83%和83.9%。说明~(18)F-FDG PET/CT偶然发现结肠局灶性高摄取病灶中癌前病变和恶性病变阳性率很高,血清CEA水平对局灶性直结肠偶发FDG浓聚灶的恶变诊断具有高的诊断价值。     

抗人癌胚抗原单克隆抗体的研制及其在免疫组化中的应用

以高纯CEA为抗原,免疫BALB／c小鼠．取其脾细胞和小鼠SP2／0-Ag14骨髓瘤细胞融合．经2次亚克隆。建立3株稳定分泌抗CEA特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。应用经纯化的该单克隆抗体进行了结肠癌组织切片的免疫组织化学实验．结果显示全部3种抗CEA单克隆抗体对结肠癌亚细胞组分均呈现特异性结合。表明已筛选出适于制作癌胚抗原临床诊断试剂盒所需的特异性单克隆抗体。     

化学发光免疫测定技术在检测肿瘤患者CEA中的应用

目的将化学发光免疫测定(Chemiluminescence immunoassay)方法应用于血清CEA测定.方法以L9(34)正交设计确定化学发光免疫测定方法检测血清CEA的最适实验条件,并对方法的特异性、敏感性和重复性进行评价.结果化学发光免疫测定方法测定血清CEA的最适实验条件为:CEA McAb包被质量浓度10mg/L,ABEI-CEAMcAb结合物使用发光强度为1.0×104mV,Hemin浓度为5μmol/L,H2O2质量分数为0.3%.结论化学发光免疫测定方法检测血清CEA特异性强、重复性好、敏感性超过ELISA和RIA方法,且与ELISA和RIA方法高度相关.     

Differential diagnostic value of tumor markers CEA,NSE and CYFRA21-1 in serum and pleural effusion

目的:探讨联合检测血清和胸水中癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片断( CYFRA21-1)在胸腔积液鉴别诊断中的价值.方法:对79例临床已确诊的胸腔积液患者(恶性47例,结核性32例)的血清和胸腔积液标本,采用化学发光法检测CEA、NSE、CYFRA21-1的含量,采用酶免疫法检测组织多肽抗原(TPS)、可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)、恶性肿瘤生长因子(TSGF)的含量.结果:恶性胸腔积液患者的6种肿瘤标志物水平均明显高于良性疾病组,差异有统计学意义(P＜0.05).血清中CEA、NSE、CYFRA21-1的在腺癌、小细胞未分化癌、鳞癌中的阳性率分别为66.7％、90.0％、72.7％,差异有统计学意义(P＜0.05),胸腔积液中CEA、NSE、CYFRA21-1的在腺癌、小细胞未分化癌、鳞癌中的阳性率分别为73.3％、100.0％、86.4％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:联合检测血清和胸水中CEA、NSE、CYFRA21-1在胸腔积液鉴别诊断及肿瘤组织学分型中有一定的价值.     

肿瘤标志物癌胚抗原及细胞角蛋白19片段对早期肺癌的诊断价值

在影像学的研究中,有时很难区分肺癌与肺良性疾病。在区别早期肺癌与肺良性疾病时,我们对两个常用的肿瘤标志物的诊断价值进行了评估。临床对655例肺癌病人及237例肺良性疾病患者血清中癌胚抗原(CEA)及细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)的水平进行了回顾性分析,其CEA以及CYFRA21-1的阳性值分别为3.2 ng/m L和3.5 ng/m L或者是其各自水平的两倍(6.4 ng/m L和7.0 ng/m L)。CEA及CYFRA21-1的水平在肺良性疾病患者中分别提高了32%和11%。CEA诊断肺癌的灵敏度和特异性分别是69%和68%,而CYFRA21-1则分别是43%和89%。因此,采取两种肿瘤标志物的联合诊断检测相对于单一标志物的检测其特异性更高。根据患者的住院状况以及患病率将其分组。其住院病人中肺癌的患病率为51%,门诊病人中肺癌的患病率为12%,正常人群中肺癌的患病率是0.1%。阳性预测值(PPVs)通过贝叶斯定理计算,并随着血清肿瘤标志物和患病率变化而变化。住院病人CEA的PPVs为69.2%,门诊病人CEA的PPVs为22.7%,在正常人群中CEA的PPVs为0.22%。而住院病人其CYFRA21-1的PPVs为80.3%,门诊病人的CYFRA21-1的PPVs为34.8%,正常人群的CYFRA21-1的PPVs为0.39%。然而,在51%的患者中,如果病人血清中表达的CEA及CYFRA21-1的阳性值很高,甚至达到它们各自水平的两倍时,它们对肺癌的诊断率为87.3%或更高。我们的结果表明:当采用联合诊断检测或者其水平达到单一检测正常参考值上限的两倍时,CEA及CYFRA21-1是除CT扫描外诊断肺癌有价值的肿瘤标志物。因此,患病率应该考虑将这些血清肿瘤标志物作为肺癌诊断的工具。     

分泌癌胚抗原肿瘤靶向性Cu,Zn-SOD的基因克隆及表达

将Cu,Zn-SOD与抗癌胚抗原（CEA）单链抗体基因（ScFvgene)融合,重组到含T7启动子的表达载体p ET-22b(＋）中,构建表达质粒pETSOD－ScFv,并转化大肠杆菌BL21（ED3）,进行了高效表达,表达物占菌体可溶性总蛋白的18％。SDS－PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达物相对分子质量为41kD,与融合基因编码蛋白质的理论值相符。该蛋白质在磊肠杆菌中为分泌型表达,有利于纯化。RIA测定表明产物能特异性地与抗原CEA结合,邻苯三酚法测定也表明产物具有SOD酶的活性,该融合蛋白为分泌CEA肿瘤的靶向性治疗及放疗、化疗后的恢复提供新的途径。     

基于PSS/PAH包被的AuNRs免疫传感器用于CEA的测定

通过聚苯乙烯磺酸钠(PSS)与聚丙烯氯化铵(PAH)以层层堆积(LBL)的形式包被到金纳米棒(AuNRs)的表面,从而替换AuNRs表面具有生物毒性的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB).将癌胚抗原(CEA)的抗体(Ab)交联到AuNRs的表面,研制出一种新的癌胚抗原(CEA)的检测方法.随着CEA与AuNRs表面的Ab发生特异性反应,使AuNRs发生自组装,从而导致其紫外可见吸收光谱发生变化.通过测量吸收光谱的变化可以实现CEA的定量检测.采用电化学交流阻抗法和循环伏安法考察了不同修饰层结合到AuNRs表面后的变化情况;考察了溶液pH、Ab与CEA的结合时间对响应的影响.在最优条件下,该传感器的检测范围为10~100ng/mL,检测下限为3.3ng/mL.