低强度电磁脉冲对细胞膜穿孔的研究

采用新型超宽频带横电磁传输室ＰＴＥＭ Ｃｅｌｌ,在低强度脉冲电场（ＷＥＭＰＦ,电压１８７Ｖ,场强２０Ｖ／ｃｍ,频率３００Ｈｚ,脉宽５０ｎｓ或１００ｎｓ）作用下,鸡红细胞膜上出现直径０．１￣０．９μｍ大小不等的孔洞,被穿孔的细胞约占所观察细胞的１％,细胞穿孔率与照射时间无明显相关。另外,还观察到有１％的细胞虽未穿孔但有小泡从膜上凸出或出现凹陷;台盼蓝能进入人红细胞,红细胞体积都明显变大;ＷＥＭＰＦ能     

嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)R551-3四环素抗性消除的研究

嗜麦芽寡养单胞菌可共代谢降解烟碱类农药吡虫啉,并且对多种抗生素具有抗性.本文通过电穿孔法消除了该菌的四环素抗性,获得了四环素敏感型菌株R551-3Tcr-,可以用作遗传转化系统的受体菌,能被转化吸收遗传载体质粒pJB866H::ndhSL,构成一对很好的嗜麦芽寡养单胞菌遗传转化系统.同时HPLC结果表明所获得的四环素敏感型菌株羟基化吡虫啉的活性并未发生改变,为进一步开展敲除和回补共代谢途径关键酶的研究工作奠定了基础.     

山羊精子电穿孔转染外源DNA影响因素及最适条件的研究

本文以山羊精子为材料用电穿孔导入法转染外源基因,为生产转基因山羊奠定基础。用血细胞计数器在显微镜下记数死亡精子数检测精子活力,并用原位杂交实验检测电击精子消化前、后阳性率,以探讨山羊精子电穿孔转染外源DNA的方法及影响因素,摸索并优化电穿孔转染程序和条件。结果显示:电穿孔导入法可用于山羊精子介导转染外源DNA;电场强度、电击时间和电击次数同时影响精子活力,其中电击时间显著影响外源DNA的内化转运(P<0.05),山羊精子最适电穿孔条件为400V、200μs、电击1次,该条件下电击后精子活力和消化前、后阳性率分别为0.45和27.6%、22.5%;最适电穿孔条件下电击洗涤精子比未洗涤精子的消化后阳性率提高14%(P<0.01),将洗涤精子与外源DNA共孵育后再电击比不孵育处理组的消化后阳性率提高5.8%(P>0.05);电穿孔处理消化后阳性率在个体间无显著差异,且电击转染的精子被内化转运到精细胞内的外源DNA分布不规则。结果表明,山羊精子电穿孔转染外源DNA的最适转染条件为对精子充分离心洗涤并与外源DNA共孵育后,在400V/200μs条件下电击1次。     

陡脉冲肿瘤治疗仪的研制及应用

在一定电场强度陡脉冲的作用下，细胞膜会形成大量微孔，其数量和孔径会随电场强度的增加而激增，从而引起膜组织断裂，导致细胞死亡，这种现象被称为不可逆性电击穿，为了研究陡脉冲对肿瘤细胞的不可逆性电击穿，应用现代电力电子技术和高电压新技术，研制出了一套脉冲峰值、脉冲宽度、脉冲重复频率和脉冲陡度独立可调的能量可控陡脉冲肿瘤治疗仪。分析了该治疗仪各部分电路的工作原理，在实验室调试成功的基础上，应用该仪器对人卵巢腺癌SKOV3细胞进行了细胞实验，调试时的示波器实测波形和细胞实验的电镜结果表明，该治疗仪性能稳定，能够方便地调节输出脉冲的能量，能有效地杀伤肿瘤细胞。     

低强度瞬态电磁场下动物细胞的电穿孔效应

用低强度瞬态电磁场处理动物细胞后,一些胞内蛋白可以溢出细胞,荧光标记抗体蛋白（ＩｇＧ）可以进入细胞,通过扫描电镜观察到红细胞膜上有电致孔洞,证实了低强度瞬态电磁场作用能起电穿孔。     

电磁脉冲各参数对LeLa细胞可逆穿孔影响的研究

通过对HeLa细胞进行电磁脉冲处理,可以看到细胞膜电穿孔。穿孔的几率及深度与脉冲的各参数有关。细胞膜表面的微绒毛受到一定程度的损伤,还可见到火山形的喷口和喷出物。经实验研究,得到了在离体条件下HeLa细胞电穿孔的最佳电脉冲参数。     

电穿孔法基因转染哺乳动物细胞的应用

应用电穿孔技术转染pEGFP于哺乳动物细胞，讨论了电穿孔技术的应用条件，影响因素，初步确定了COS7、Hela、HepG2、K562、Jurkat等细胞系的转染条件，为今后的分子生物学研究打下了良好的基础。     

电击基因转移系统的研究

电击法是一种新的生物技术，其转化效率是用化学法所得不到的．ＬＮ—１０１和ＬＮ—２０１是两种基因脉冲导入系统，能提供可以控制的高压、大电流脉冲。     

低强度瞬态电磁场脉冲作用于不同动物细胞形成电穿孔的实验比较

电穿孔是由电磁脉冲作用引起细胞或生物组膜半通透性暂时或永久性丧失出现穿孔的现象 .目前电穿孔技术已广泛应用于生物技术、基因工程及临床医学等很多领域 ,而其研究多集中于针对单个或数个瞬时高强度脉冲 (电场强度为 10 2 ～ 10 3ｋＶ/ｍ ,脉冲作用时间一般为 10 - 6 ～ 10 - 3ｓ)作用下细胞或组织膜的穿孔现象 ,与此相关的机理分析及实验研究已较为详尽[1～ 4 ] .近 10年来 ,我们一直致力于弱电磁场的非热生物效应的研究 ,并采用电场强度几ｋＶ/ｍ、脉冲宽度几个ｎｓ～ 10 0ｎｓ的低强度瞬态电磁脉冲对生物样品进行照射实验 ,结果发现…