用复性电泳技术研究溶酶体蛋白水解酶的性质和活性

介绍了复性单向电泳（Ｇ－ＰＡＧＥ）和复性双向电泳（ＩＥＦ－Ｇ－ＰＡＧＥ）的概念、原理、方法、应用范围、优缺点和使用该方法应注意的事项。并用该方法定性和定量分析了Ｃ６大白鼠神经胶质瘤细胞酸性溶酶体蛋白水解酶的性质和活性。     

Archaeal acylamino acid releasing enzyme/lipase:Crystallization and preliminary crystallographic analysis in a new crystal form

A primitive orthorhombic crystal form of acylamino acid releasing enzyme‘lipase(APE1547)from hyperthermophilic archaeon Aeropyrum pernix strain K1 has been obtained at 291K.The diffraction pattern of the crystal extends to 0.27nm resolution at 100K using Cu Kαradiation.The crystal belongs to the space group P212121 with unit cell dimensions of b=6.399,b=10.439and c=16.953nm.The presence of two molecules per asymmetric unit gives a crystal volume per protein mass(Vm)of 0.0022nm^3 Da^-1 and a solvent content of 43% by volume.A full set of X-ray diffraction data were collected to 0.3nm from the native crystal.     

猪肾氨基酰化酶Ⅰ的初步晶体学研究

<正>氨基酰化酶Ⅰ(aminoacylase I,ACY-1)(3.5.1.14)主要存在于哺乳动物的肾脏和微生物中,是生物体进行氨基酸代谢时一个重要的水解酶,它可逆地催化酰化L-氨基酸的水解反应.该酶由772个氨基酸组成,分子量为85.500ku,是一个寡聚酶,由两个相同亚基组成,每个亚基含有一个锌离子.猪肾ACY-1与人的ACY-1的核酸序列有88.3%的同源性,氨基酸序列的同源性为87.7%.将猪肾ACY-1的氨基酸序列放在PROSITE数据库中检索,除了几个潜在的蛋白激酶磷酸化的位点和2个可能的N-糖基化位点外,没有其他明显的特征.把猪肾ACY-1的核酸序列和氨基酸序列与EMBL/GenBank和SwissProt Database中的序列进行比较,除了由E.coli表达的酰氨酶(amidase,succinyl-diaminopimelate desuccinylase),没有发现它与其他蛋白质有同源性,Wilbur-Lipman Algorithm统计分析表明,酰氨酶与猪肾ACY-1序列在400个氨基酸长度内有24%的等同性、这些结果提示,ACY-1是一类新的含锌金属蛋白.张艳等人用CD和FTIR谱对它的二级结构进行了研究.     

酶反应偶联离子色谱法检测甲胺磷农药

有机磷农药的检测一直是人们感兴趣的研究课题.本文介绍了应用酶反应偶联离子色谱法测定甲胺磷农药.该方法基本原理是:植物水解酶促进乙酸萘酯分解生成乙酸.甲胺磷农药抑制植物水解酶的活性,植物水解酶的活性随甲胺磷浓度增加而降低,乙酸萘酯分解生成的乙酸也减少,离子色谱能够快速灵敏准确的检测生成的乙酸的减少量,由生成的乙酸的减少量定量甲胺磷农药.应用本方法,测定了甲胺磷农药,线性范围在0.24～120μg/mL,相对标准偏差(RSD%)=5.3%,测定结果准确灵敏.     

溶菌酶在食品中的应用

溶菌酶(Lysozyme)，又称胞壁质酶，是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶，因其有溶菌作用，故命名为溶菌酶。溶菌酶是由129个氨基酸构成的单纯碱性球蛋白，化学性质非常稳定。由于细菌细胞壁对溶菌酶的敏感性这种作用，因而在食品领域获得了广泛的应用。     

USP22通过AKT磷酸化途径影响肝癌细胞增殖

利用RNA干扰技术研究USP22沉默对肝癌细胞系增殖的影响及其可能的分子机制。本研究采用USP22小干扰RNA技术,对体外培养的USP22阳性肝癌细胞株HepG-2及SMMC-7721细胞株进行si RNA转染,用qRTPCR及Western blot技术分析胞内USP22、AKT、p-AKT表达水平,并利用CCK8检测细胞增殖能力。结果发现:USP22-siRNA转染24h及48h后,两株肝癌细胞株胞内USP22水平明显降低,AKT磷酸化水平明显降低。CCK8结果显示,USP22沉默和显著抑制肝癌细胞增殖能力。结果提示:对USP22的沉默可显著抑制AKT的磷酸化,USP22可能通过AKT的磷酸化途径促进肝癌细胞增殖。USP22可能是肝癌患者预后的重要靶点。     

有机磷农药与牛血清白蛋白的相互作用及分析应用

应用荧光光谱、同步荧光光谱和紫外吸收光谱研究了3种有机磷农药(敌百虫、乐果和甲基对硫磷)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.实验表明敌百虫和甲基对硫磷与BSA的相互结合作用是单一静态猝灭过程,而乐果与BSA的相互结合作用是静态为主、动态为辅的猝灭过程.首次发现有机磷药物与BSA结合作用同药物疏水性直接相关:随着有机磷药物疏水性增大,猝灭常数KSV增大、BSA构象改变增大、药物与BSA的结合距离减小.有机磷药物与BSA的结合作用随着有机磷疏水性增强而增加.基于蛋白质与有机磷的结合作用研究,初步探讨了水产品中有机磷药物残留的提取方法,并利用气相色谱法检测了水产品中乐果和甲基对硫磷的含量,方法的回收率为85.71％～107.21％.该方法准确度高、简单、快速.     

Isolation,purification and characterization of a new organphosphorus hydrolase OPHC2

A bacterium with the capability of degrading organphosphorus, identified as Pseudomonas pseudoaicaligenes, is isolated from OP-treated soil. The organphosphorus hydrolase OPHC2 from this bacterium has been purified and characterized. OPHC2 has optimum activity for the reaction at 65℃ and pH 9.0 with methyl parathion as a substrate, it also shows good thermal and pH stability. Most metal ions and chemicals have no effect on the activity of OPHC2. The analyses of nucleotide sequence encoding OPHC2 and amino acid sequence of OPHC2 show that there are lower homologies with those of organphosphorus hydrolase reported in GenBank.     

硅烷化磁铁粉固定胰蛋白酶的研究

分别以硅烷经磁铁粉、硅烷磁化脱乙酰几丁质及脱乙酰几丁质作载体，甲醛或戊二醛为交联剂，对胰蛋白酶的固定化条件及所制备的固定化酶的性质进行了研究。     

有机磷水解酶基本性质探索

针对有机磷农药的残留问题,我国的科学家已研发出高产的机磷水解酶(Organicphos phorus hydrolase,简称OPH,俗称解毒酶)生产工程菌,同时,解毒酶的生产已经开始了向产业化发展的进程,有部分解毒酶制剂已投放市场。本文对有机磷水解酶基本性质进行了探索.