稀土材料在甘蓝无公害生产上的应用研究

甘蓝是我区具有区域经济特色的优势蔬菜作物，当地甘蓝产品，无污染，品质及口感好，深受外地客商的青睐，近年来种植面积不断扩大。据资料介绍。稀土材料具有增强作物抗逆性，促进养分吸收，改善品质，提高产量的良好作用。为验证稀土材料在甘蓝上的增产作用，进一步提高我区甘蓝无公害标准化生产水平和质量，我们在内官镇内官村设置了稀土材料在甘蓝无公害生产上的应用试验研究。现将试验结果总结报告如下：     

甜菜夜蛾人工饲料的研究

研究了营养对甜菜夜蛾生长发育的影响,从２８种不同的人工饲料配方中,筛选出一种有利于甜菜夜蛾生长发育的人工饲料．饲养结果表明,该饲料具有饲养效率高、产卵量多、历期短等特点,并连续饲养１５代．同时还研究了胆固醇、氯化胆碱及复合维生素对甜菜夜蛾的生长发育的影响,实验表明,胆固醇、氯化胆碱对甜菜夜蛾卵的形成及发育起重要作用,是人工饲料中不可缺少的２种成分     

零上低温对甘蓝幼苗逆境指标的动态影响

以甘蓝幼苗为材料，研究了零上低温对其部分生理生化指标的影响．结果表明：随着低温(5℃)处理时间的延长，甘蓝幼苗体内的脯氨酸含量、总糖、可溶性糖含量、丙二醛含量逐渐升高．而脂肪酸、蛋白质含量逐渐降低，体内SOD，POD活性先升高再降低．     

甘蓝磷酯酶D HKD2功能区基因片段的克隆与反义表达载体的构建

以甘蓝(Brassiaca oleracea)为材料，取幼叶分离mRNA，反转录合成cDNA，以cDNA第一链为模板，通过PCR扩增，获得甘蓝磷酯酶D(Phosphorate　Lipid　Dehydrolase，PLD)HKD2功能区的基因片段．对其进行Blast分析，结果表明，分离的目的片段核苷酸序列与Genbank中报道的甘蓝PLD基因相比同源率为99．7％，只有2个碱基发生改变．将得到的PLD基因片段插入植物表达载体pAT940，构建了PLD基因反义表达载体pATC—rPLD，为下一步进行抗逆转基因作物选育打下基础．     

转化脂介导甘蓝转化获得转基因植株

如何将外源基因高效地导人植物原生质体是转化技术中的一个关键问题.除了常用的PEG法和电激法外,由于脂质体(Liposome)在作为植物细胞工程载体时具有人造性、稳定性、广宿主性和超载性等特点,脂质体介导法已越来越为人们所重视。目前,在采用不同方法的基础上,通过脂质体介导已对水稻、芜菁、野胡萝卜、烟草等材料进行了不同基因的转化,得到了令人较为满意的结果。     

Induction of nicotine in tobacco by herbivory and its relation to glucose oxidase activity in the labial gland of three noctuid caterpillars

Tobacco Nicotiana tabacum L. is a host plant ofHelicoverpa armigera (Huibner), Helicoverpa assulta Guenee and Spodoptera litura (Fabricius) (Lepidoptera, Noctuidae). The difference in leaf nicotine response to the feeding by these three larvae and the mechanical simulation of their feeding was examined by HPLC. Results indicated that nicotine induction was suppressed by H. armigera and H. assulta larvae feeding or by simulated damage treated with their labial glands extracts. The production of nicotine was also suppressed by the glucose oxidase from Aspergillus niger when it was treated on mechanically wounded leaf area. On the contrary, the nicotine production was stimulated by S. litura larva feeding or by simulated damage treated with its labial gland extract. Heat denature can not counteract the stimulation effect of the S. litura labial gland extracts to tobacco nicotine production. The glucose oxidase activity was detected in labial gland extracts of both H. armigera and H. assulta, but the activity in H. armigera was significantly higher than that in H. assulta. No glucose oxidase activity was detected in labial gland extracts of S. litura. It is shown that the glucose oxidase activity in labial glands of caterpillars plays an important role in the nicotine response to herbivory. The glucose oxidase was mainly contained in the labial gland of H. armigera larva, and had the highest activity at pH 7.0. D-Glucose was the optimal substrate of the glucose oxidase. Labial gland glucose oxidase activities varied daily during larval development with high activities found when larvae were actively feeding.     

杆状病毒诱导凋亡昆虫细胞中的线粒体反应和Ca2+的变化

以罗丹明123作为线粒体跨膜电位荧光标记探针, 流式细胞术和激光共聚焦显微镜研究显示, SfaMNPV诱导凋亡的斜纹夜蛾SL-1细胞, 线粒体跨膜电位(∆Ψm)产生明显改变, 病毒接种后4 h, 膜电位开始下降, 随着病毒感染进程的延续, 线粒体膜电位∆Ψm持续降低. 利用Western 杂交分析定位于线粒体的Bcl-2蛋白, 结果表明, 线粒体Bcl-2蛋白含量随病毒感染逐渐减小, 表达水平降低, 病毒感染下调了Bcl-2蛋白的表达. Western杂交检测到显示细胞色素c从线粒体向细胞质中释放, 并在细胞质逐渐积累, 呈时间依赖性特征. 病毒感染诱发的线粒体反应, 提示杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡, 可能存在线粒体介导的凋亡信号转导途径. 以Ca²⁺荧光探针Fluo-3/AM负载, 激光共聚焦显微镜观察和荧光分光光度计测定凋亡细胞 [Ca²⁺]_i浓度的变化, 检测到病毒诱导凋亡细胞内的[Ca²⁺]_i浓度明显升高, 细胞外Ca²⁺内流; 在EGTA抑制胞外钙离子内流和细胞质Ca²⁺钳制状态下, PI染色后流式细胞仪检测显示细胞凋亡不受影响, 说明胞质内游离Ca²⁺升高和胞外钙离子内流不是细胞凋亡的主要诱因, 提示内质网钙库Ca²⁺排空可能是SfaMNPV诱导SL-1细胞凋亡信号转导通路中的重要媒介.     

玉米oxylipins信号途径关键基因的克隆及其在虫害诱导防御中的作用

采用RT-PCR的方法, 从茉莉酸处理的玉米叶片中克隆了oxylipins信号途径的3个关键调控基因(ZmAOS, ZmAOC和ZmHPL) cDNA片段, 并根据同源性比较, 获得了全长cDNA. 基因表达分析表明, 甜菜夜蛾危害可以诱导oxylipins信号途径关键基因的表达, 且与外源茉莉酸甲酯的诱导作用相似; 虫害对玉米未受损伤叶片防御相关基因(主要是一些调节植物防御物质合成的基因)有明显诱导作用, 且与外源茉莉酸处理叶片的表达特性极为相似; 先用茉莉酸信号途径的抑制剂SHAM处理玉米后, 虫害不能诱导玉米防御基因的表达; 外源绿叶性气味物质(GLVs)及β-罗勒烯处理对玉米防御相关基因的表达有明显诱导作用, 同时外源GLVs及β-罗勒烯处理可以诱导茉莉酸信号途径关键调控基因的表达, 但不能诱导ZmHPL基因的表达; 用茉莉酸信号途径的抑制剂处理玉米后, GLVs处理对玉米防御基因表达的诱导作用明显降低, 说明 oxylipins信号途径在虫害诱导玉米产生化学防御的过程中起着关键作用, 茉莉酸是其中重要的内源信号物质, 而另一类oxylipins(GLVs)则作为外部的信号物质在虫害诱导植物产生系统性防御过程中起信息传递作用, 且这种外部的信号物质部分是通过茉莉酸信号途径起作用.     

斜纹夜蛾核多角体病毒感染甜菜夜蛾细胞的研究

 研究发现斜纹夜蛾核多角体病毒（Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus,SpltNPV）不能成功感染同属甜菜夜蛾（S. exigua,Se）昆虫,为深入研究SpltNPV在离体Se301细胞中的感染进程以及病毒感染失败的原因,对感染后Se301细胞进行DNA复制、病毒基因转录以及病毒蛋白表达等检测。结果显示被感染的Se301细胞中病毒完成了DNA的复制和病毒早、晚期基因转录,但检测不到极晚期基因多角体基因（polyhedrin）的表达,病毒的蛋白表达受阻从而影响了病毒完成复制周期。 研究发现病毒蛋白表达受阻是SpltNPV在Se301细胞中无法形成子代病毒,完成整个病毒复制的主要原因,这为深入研究其感染失败机理奠定了坚实基础。     

瘦银锭夜蛾Macdunnoughia agnata 在兰州地区的分布及其生物学特征

报道了瘦银锭夜蛾(Macdunnoughia agnata)在兰州地区的新分布;初步观察了该物种在兰州地区的分布范围、为害植物种类;确认了瘦银锭夜蛾在兰州地区是以卵越冬,一年繁殖2代等生物学特征.由于瘦银锭夜蛾是重要的农业害虫,因此,为这一物种的发生、危害和防治提供了重要参考资料.