一种基于酵母3',5'-二磷酸核苷酸酶的蛋白亲和层析纯化体系

<正>蛋白质是生命活动的主要承担者。蛋白质的结构和功能的研究在后基因组时代尤为重要。为深入分析蛋白质的结构和功能,研究者们需要分离纯化大量不同的蛋白质。亲和层析具有高选择性、高活性回收率和高纯度等特点已成为纯化蛋白质等生物大分子最有效的技术之一。目前,常用的亲和层析标签有多聚组氨酸、谷胱甘肽转硫酶、麦芽糖结合蛋白等,但不同的标签各有其优缺点。例如:研究发现如果表达的蛋白表面有几个接近的组氨酸,此蛋白可能结合Ni-NTA介质,最终和目的蛋白一同洗脱下     

猪末端转脱氧核苷酸酶的分离纯化

末端转脱氧核苷酸酶催化脱氧垓苷三磷酸连接到单链多聚脱氧核苷酸的3′—OH末端。猪胸腺匀浆抽提液,经磷酸纤维素吸附层析,硫酸铵分级沉淀,DEAE—纤维素负吸附,葡聚糖凝胶G100过滤和两次羟基磷灰石柱层析,分离后得到该酶,纯化倍数达2736倍。葡聚糖凝胶G100过滤分离出三个活力峰,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示其分子量分别为60000,53000和32000道尔顿,其中53000组分比活最高,达每毫克蛋白3135活力单位。     

竹叶青蛇毒5‘—核苷酸酶对血小板聚集功能的抑制机制…

本文报道了竹叶青蛇毒中分离的５＇－核苷酸酶对家兔血小板的聚集抑制机制探讨。该酶能抑制ＡＤＰ、ＡＡ、ＴＭＶＡ、凝血酶诱导的血小板聚集，且对ＡＤＰ诱导的血小板聚集有明显的解聚作用。其抑制率与剂量增加成正比。该酶在抑制ＡＡ和ＴＭＶＡ诱导的血小板聚集的同时，对于血小板中５－羟色胺（５－ＨＴ）释放亦有明显抑制，抑制率同样与剂量相关，不能抑制ＴＸＢ２的生成。洗涤血小板抑制作用实验表明对竹叶青蛇毒５＇－核苷酸酶     

裸鼠皮肤组织淋巴管的细微分布

本文应用５＇－Ｎａｓｅ－Ａｌｐａｓｅ双重染色法观察了裸鼠皮肤组织淋巴管的细微分布。在光镜下毛细淋巴管和淋巴管呈５＇－Ｎａｓｅ强阳性反应，管壁显示明显的棕色或深棕色，而毛细血管或血管的Ａｌｐａｓｅ显示强阳性，管壁呈明显的蓝色。据此可用组化方法将淋巴管、血管区别开来。实验结果表明：裸鼠皮肤真皮内有较多的毛细淋巴管，皮下组织和肌肉内可见毛细淋巴管和淋巴管。本研究同时作了光镜半薄切片，证实了上述的淋巴管分布。上述结果为进一步研究鼻咽癌裸鼠皮下移植后自发性淋巴道转移机理，癌组织内淋巴管的细微分布提供可靠的方法。     

脉冲电磁场与小鼠酶活性的变化

报道了脉冲电磁场照射小鼠 8h后 ,通过酶组织化学方法发现 ,小鼠的皮肤、小肠、肝脏的 5′ 核苷酸酶 (5′ N)和腺苷三磷酸酶 (ATPase)的活性都受到明显的影响 .     

正常和白血病小鼠白细胞中5’-核苷酸酶的性质

正常小鼠615和可移植性白血病小鼠L7712脾脏及腹水白细胞中5′-核苷酸酶性质的初步研究表明,正常小鼠白细胞中该酶含量较高;L7712小鼠的三尖杉酯碱或阿霉素抗性株的脾脏白细胞中5′-核苷酸酶活性高于敏感株,但在腹水白细胞中二者无明显差别;小鼠白细胞中5′-核苷酸酶作用于CMP的活性大于作用于AMP,这两种活性不能通过层析分开;根据体外实验,三尖杉酯碱对5′-核苷酸酶的活性无直接影响,L7712小鼠白细胞中有一种影响该酶活性的耐热因子。     

竹叶青（Trimeresurus stejnegeri）蛇毒

用ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ－５－分离竹叶青粗毒，再经ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－ＣＬ－６Ｂ、ＱＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ－５０和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００纯化，得到一个５－核苷酸酶，对血小板聚织要具有强抑制作用，在ＳＤＳ－聚丙烯酰谘电泳图谱上为一单一蛋白带，分子量为８２５００，是一个糖蛋白，含６．７％中性糖和０．７％唾液酸。