大鼠肝ADAMs种类鉴定及肝再生过程中ADAMsmRNA差异分析

以 2 / 3肝切除 (patialhepatectomy ,PH)大鼠为材料 ,利用PT -PCR技术 ,通过ADAMs通用引物初步分析了肝脏中ADAMs种类及PH后恢复 4h和 36h时ADAMsmRNA差异。结果表明 :PH后不同恢复时间ADAMsmRNA的扩增谱带没有差异 ,但扩增谱带的强弱有变化 ;cDNA克隆和测序分析表明 ,大鼠肝脏有ADAM15和ADAM 19mRNA同源序列。     

玉米候选抗病相关基因片段的克隆

根据已经克隆的植物抗病基因和候选抗病基因的保守序列P-loop、Kinase-2及GLPLAL设计一系列简并引物，利用同源序列扩增法，对玉米的基因组DNA进行PCR扩增，并对5个扩增产物的克隆进行测序．测序结果在Gen—Bank内进行BLAST检索，发现A9克隆序列与玉米BAC库中的206C17克隆的部分序列有很高的相似性，并且距离GenBank内注册的玉米抗锈病基因rpl位点中的rpl-3基因、rpl-4基因分别约有66Kb、20Kb，且A9克隆序列在玉米基因组中是单拷贝的．这为玉米抗锈病性状的分子标记辅助选择和抗锈病基因的克隆奠定了良好的基础。     

葡萄的随机扩增多态性DNA研究

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)对11个样品进行了研究．这11个品种包含1个欧美杂交种，一个中国野生种(Vitis．piasezkii Var．pagnucii)，9个欧亚种(Vitis．vinifera L)．选择了多态性好的7个10碱基寡聚糖核苷酸作为随机扩增的引物，在琼脂糖凝胶电泳上产生了76条带，其中63条具有多态性．各引物产生的条带从6到13不等，平均为10．86条／模板，其中9条具有多态性，表明葡萄基因的多态性十分丰富．通过遗传相似性分析表明11个葡萄基因的Nei氏相似性系数分布为0．1027-1．1787，平均相似系数为0．459．通过非加权算术平均数聚类法，获得了11个葡萄品种之间的遗传关系树图，欧亚种群，东亚种群和欧美杂种在遗传关系树图上被成功地聚为3组．本实验发现欧亚种和欧美杂种亲缘关系较近，而和中国野生种亲缘关系远．在欧亚种中，520A和S04的遗传距离最近，其次是井川1010和美人指，最大的遗传距离发生在桑无核和其他欧亚种之间．     

籼稻93-11和粳稻日本晴DNA插入缺失差异片段揭示的水稻籼-粳分化

碱基的插入/缺失(InDel)引起DNA序列变化并形成了DNA片段长度多态,可以用作遗传标记.为了评价基于籼稻93-11和粳稻日本晴全基因组序列比对获得的差异片段而设计的InDel引物在鉴定籼稻和粳稻两种生态型以及研究稻属不同物种之间亲缘关系的意义,采用45对InDel引物,对来自亚洲10个国家的49份籼稻、43份粳稻品种和24份野生稻进行了检验.结果表明,其中41对InDel引物鉴定籼稻或粳稻品种的准确率高于80%.主成分分析散点图显示:籼稻与粳稻存在明显的遗传分化;含AA基因组的野生稻物种与籼稻品种存在较近的亲缘关系;非AA基因组的野生稻物种不存在明显的籼-粳分化.并且证明了基于籼稻93-11和粳稻日本晴全基因组序列比对获得的InDel差异片段设计的引物可以用于栽培稻籼稻和粳稻品种的鉴定以及籼-粳分化问题的研究,及探索稻属不同物种间的亲缘关系.     

澳洲鳗、日本鳗和欧洲鳗的RAPD初步比较分析

运用RAPD技术,以日本鳗Anguilla japonicus、欧洲鳗Anguilla anguilla和澳洲鳗Anguilla australia尾鳍DNA作为模板,在20种随机引物中筛选出4种随机引物进行扩增反应,得到这3种鳗鱼DNA的RAPD扩增片段,通过比较这3种鳗鱼的扩增条带的特异性、种间相似性指数(日本鳗和欧洲鳗之间的相似指数为0.556 5,日本鳗和澳洲鳗、欧洲鳗和澳洲鳗的相似指数分别为0.510 2和0.5278)和遗传距离,探讨这3种鳗鱼的遗传差异,为鳗鱼的种质鉴定奠定基础。     

检测线粒体DNA SNPs的快速测定法--引物延伸-飞行时间质谱法

用PCR扩增出人类mtDNA HV Ⅰ区443bp片段作为模板,以nt16093位点特异的引物进行引物延伸反应。产物经纯化后利用MALDI-TOF质谱技术进行检测,从而建立起引物延伸—飞行时间质谱法快速检测SNPs的技术,并用该法对人类mtDNA HV Ⅰ区SNPs位点nt16093的T／C多态性进行频率调查。结果为广州地区汉族人群的mtDNA HV Ⅰ区多态位点nt16093T型的频率为89．6％,C型的频率为10．4％。并且发现3例异质性。     

微卫星标记引物的开发及其在棉花中的应用

本文综述了微卫星标记引物开发的三类主要方法:构建基因组文库筛选的方法、直接PCR扩增为基础的方法、数据库筛选为基础的方法。概述了每种方法的实验步骤,总结了其优缺点,提出了新的发展思路,并简述了微卫星标记在棉花中的最新应用情况。     

一种快速、经济、有效纯化人工合成寡核苷酸片段的方法

采用DEAE-52纤维紊小柱，纯化了7个人工合成的寡核苷酸引物．纯化效果栗用岛津(uy-265)分光光度计扫描，8mol／L尿素-12%聚丙烯酰胺凝胶电泳及自提的模板DNA经PCR检测．该法分传统的HPLC法及PAGE法相比，具有快速、经济、有效的优越性。     

濒危植物单羽苏铁SSR引物的筛选

以濒危植物单羽苏铁为材料,利用改良的CTAB法提取其总DNA.利用5个单羽苏铁居群的91个个体,对已从苏铁属其他植物开发的65对核SSR引物进行筛选,并对引物的多样性指数进行检测分析.共筛选到多态性高、扩增稳定的SSR引物20对.在这20对引物中,检测到的等位基因数平均为9.75,有效等位基因数平均为4.769,香农多样性指数平均为1.473,观察杂合度平均为0.380,期望杂合度平均为0.636,固定指数只有引物4的小于0.绝大多数引物都偏离了哈迪-温伯格定律,并达到了极显著水平.以上结果为单羽苏铁的遗传多样性和遗传结构的进一步分析提供了依据.     

水稻抗条纹叶枯病分子标记在不同品种中的扩增比较

以感水稻条纹叶枯病品种＂日本晴＂、高抗品种＂kasalath＂以及14个目前在我国长三角地区水稻生产中被认为在抵抗条纹叶枯病方面具有较好效果的水稻品种为材料,分析比较了14对分子标记引物扩增16个水稻品种基因组获得的DNA产物.结果显示：在14对分子标记引物中,有8对在扩增感病品种＂日本晴＂和高抗品种＂Kasalath＂水稻基因组时可获得多态性条带.因此推断这8个标记可在以这两个品种为亲本的抗条纹叶枯病选育中使用;并且,本研究结果还将为利用本试验收集的14个水稻品种为亲本的分子标记辅助育种提供重要的背景信息.