刚地弓形虫培养上清抑制THP-1细胞增殖及诱导凋亡的研究

摘要：目的提取弓形虫体外细胞共培养上清,并研究上清对人急性单核细胞白血病细胞THP-1增殖及凋亡的影响。方法收集对数生长期的THP-1细胞以5X10^7／ml细胞浓度接种于不同培养瓶中,对照组加入含10％胎牛血清的RPMll640,实验组加入相同体积不同数量（2×10^7／ml、4X10^7／ml、8×10^7／m1）弓形虫速殖子培养上清,采用四甲基氮噻唑蓝（MTY）法检测吸光度（A490值）并计算THP-1细胞增殖抑制率;倒置显微镜下观察细胞形态变化;Annexin-V-FITC／PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率变化,以Western印迹方法分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达或活性。结果MTY法检测结果弓形虫培养上清呈时间剂量依赖性抑制THP-1细胞株增殖,倒置显微镜下观察处理组细胞有发泡现象和凋亡小体出现。流式细胞仪检测弓形虫感染后的THP-1细胞凋亡率较对照组有升高趋势（P〈0．05）,呈量效依赖性,Westernblot检测刚地弓形虫培养上清作用于THP-l细胞48h后实验组的Bax、Bcl-2蛋白表达较对照组的比值分别有明显的升高与降低（P〈0．05）。结论刚地弓形虫速殖子培养上清对体外培养THP-l细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导THP-1细胞凋亡。     

RH株弓形虫抗原及高效价多克隆抗体的制备

通过制备和分析弓形虫抗原蛋白，并以此抗原制备高效价的兔抗弓形虫多克隆抗体，为弓形虫的免疫检测和诊断提供有效的方法和途径，同时也为基因工程产物的鉴定提供方便有效的检测手段．速殖子主要来源于感染后72～74h获得的腹水，通过常规方法制备和提纯弓形虫可溶性抗原，采用SDS-AGE方法分析抗原蛋白的分子量．以抗原和福氏佐剂制备成完全和不完全福氏佐剂通过脊柱两旁皮下多点免疫的途径免疫新西兰大白兔，制备兔抗弓形体多克隆抗体，间接ELISA法检测血清中抗体的效价．经过观察所获得的虫体阶段主要处在宿主细胞巨噬细胞内而尚未逸出阶段，通过对结果的分析，所制备的弓形体抗原的分子量主要集中在17～156ku之间，与文献报道有差异，兔抗弓形体抗体效价在60000以上．该研究结果将为弓形体的蛋白质研究，免疫诊断、预防及有效治疗奠定基础．     

特殊人群弓形虫感染的研究进展

目的:了解特殊人群弓形虫感染情况.方法:查阅近几年来国内外有关文献资料,了解特殊人群弓形虫感染状况.结果:特殊人群弓形虫感染率较普通人群高.结论:特殊人群对弓形虫普遍易感,应加强防治.     

弓虫病治疗方法的研究

探索弓形虫病的有效治疗药物为目前临床亟待解决的课题之一.研究用双氢青蒿素(Dihyolroartemisinin科泰新)及阿奇霉素(Azithromycin)治疗弓形虫病,进行从动物试验到临床的观察.在动物实验有效的基础上,首次从临床证实双氢青蒿素对各种类型弓形虫患者和活动性感染者有较好治疗效果.     

恶性肿瘤与弓形虫感染

概述了弓形虫病的流行概况、发病原因、传播途径及防治措施。并通过流行病学资料论述了恶性肿瘤患者对弓形虫的易感性，从而分析了弓形虫感染与恶性肿瘤之间的关系及其临床价值。     

分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用弓形虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,取脾细胞,与Ｓｐ２／０ 细胞融合,获得３ 株能稳定分泌抗弓形虫单克隆抗体的细胞。细胞培养上清液和腹水中的单克隆抗体效价分别为１∶１６ ～２５６ 和１０ － ６ ～１０ － ７ 。单抗类型均为ＩｇＭ。杂交瘤细胞经液氮冻存１２ 个月后,复苏生长良好,分泌活性稳定。在ＭｃＡｂ－ Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ 实验中,所能测出可溶性抗原的最小浓度为１０ ｎｇ／ ｍＬ     

吉林地区孕妇弓形虫感染的免疫学检测临床研究

目的探索吉林地区孕妇弓形虫感染情况.方法运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测196例孕妇(妊娠8周～7个月)静脉血中弓形虫(Toxoplasma godii,TO)抗体,即Tox-IgG抗体和Tox-IgM抗体.结果发现有猫犬接触史(指现在或曾经养过猫犬的)的孕妇弓形虫感染率明显高于无猫犬接触史的孕妇(P<0.01),两者有显著性差异;但城市与乡镇孕妇弓形虫感染率无显著性差异(P>0.05);而首次妊娠孕妇与非首次妊娠孕妇弓形虫感染率有显著性差异(P<0.05).结论有无猫犬接触史是孕妇感染弓形虫的主要因素,二者相关性显著.     

弓形虫SAG1,ROP1基因及其复合抗原基因的核酸免疫研究

目的 检测混合SAG1和ROP1编码基因真核表达质粒疫苗诱导小鼠的免疫应答,评价其抗弓形虫感染的保护性免疫效果.方法 将SAG1和编码基因片段克隆入pEGFP-N3表达载体,构建重组质粒;RT-PCR体外验证重组质粒在NH3T3细胞中的表达;通过检测抗体、抗体分型及细胞因子来评价体液免疫和细胞免疫;腹腔内注射毒性株弓形虫速殖子攻击免疫小鼠.结果 RT-PCR结果显示重组质粒能在哺乳动物细胞内表达;SAG1和ROP1混合重组质粒疫苗诱导小鼠产生很强的体液免疫和细胞免疫,对于毒性株弓形虫感染攻击具有保护作用.结论 不同候选抗原编码基因重组质粒能够诱导小鼠产生抗弓形虫感染保护性免疫,提示含有多种成分的混合DNA疫苗的研制可作为核酸免疫研究的策略之一.     

鼠腹腔中弓形虫的增殖发育及S.D.对其的影响

对鼠腹腔中弓形虫速殖子的增殖发育的方式、过程及S.D.对其的影响作了详细的考察,结果表明弓形虫的无性生殖方式有内二裂殖、纵二裂殖、裂殖生殖等,虫体以鼠腹腔内巨噬细胞的胞壁作为假包囊壁有其中增殖发育,经过72h的增殖生长,虫体成熟后突破假包囊逸出,S.D.可部分抑制速殖子增殖。