D-海因酶基因重组子的构建和酶的表达活性

以中华根瘤菌(Sinorhizobium morelense)SS—ori总DNA为模板，用PCR法扩增D-海因酶基因，分别克隆到5种不同的载体，并转入5种不同的Escherichia coli菌株，获得25株工程菌，进行培养与诱导表达．细胞经超声处理后，通过SDS—PAGE和酶活性两种指标比较表达产物．结果表明，除3株工程菌具有D-海因酶活性外，其它均为无酶活性的不溶性包涵体，包涵体经变性、复性后，可部分获得有活性的D-海因酶，其比活为0．90U／mg，复性率约为20％．此外，对包涵体产生的原因及可能解决办法也进行了讨论．     

灵芝功能饮料醋酿制最佳工艺参数的选择

在灵芝培养液中加入适宜浓度的食用酒精，进行生物反应，酿制成具有灵芝保健功能的饮料醋，从自分离出的醋酸菌株中，筛选出生物反应工程菌，研究工程菌、灵芝菌液用量及酒精度等因素水平对最终产品质量与风味的影响。用正交试验结果的直观分析得出最佳工艺参数：工程菌为LEC-2。灵芝菌液用量为30％。酒精度为6％。为生产提供了可行性依据。     

重组葡激酶(r-Sak)工程菌发酵工艺的研究

通过对影响重组葡激酶表达的几个主要因素的研究，建立了较为适宜的发酵条件：接种量4%；初始pH7.2；在A600nm=2.5时加20%蔗糖诱导，诱导后4～5h收获，发酵液上清r-Sak含量可达到250mg/L以上，酶活力可达到6500RU/ml以上。     

重组锰超氧化物歧化酶工程菌摇瓶发酵条件的优化

通过单因素试验对重组锰超氧化物歧化酶(Recombinant Manganese Superoxide Dismutase,rMn-SOD)工程菌的摇瓶发酵的培养基(碳源、氮源、无机盐)和培养条件(接种量、乳糖浓度、时间、温度、摇床转速、pH值等)进行了初步优化.结果表明,工程菌发酵的优化培养基组分(质量分数)为:1.5%蛋白胨、1.5%酵母提取物、1.0%NaCl、0.4%KH2PO4、0.8%K2HPO4、1.5%(体积分数)甘油、0.2%NH4Cl和5 mmol/L MnCl2.乳糖诱导表达的优化条件为:以5%接种量培养5 h后,加入质量分数为0.25%的乳糖进行诱导表达6 h.当发酵温度为37℃、摇床转速为180 r/min、培养基的初始pH值为7.0时,表达的rMn-SOD的酶活力高.在优化条件下,工程菌的SOD活性达1 969.9 U/mL,比活力达1 081.8 U/mg.     

IBAC工艺对洗浴废水中有机污染物的去除效能与机理

采用以固定化生物活性炭IBAC为主的处理工艺对洗浴废水进行处理.处理后水的浊度、高锰酸盐指数、LAS和浴臭平均值分别为2.46 NTU,3.2mg/L,0.13mg/L和0级臭味,为了保证整体工艺的出水,IBAC进水的浊度要小于10 NTU;通过GC/MS的检测,IBAC对这种水中的有机物具有较好的去除作用.在运行10个月后的IBAC上,人工固定化的工程菌仍占优势,活性炭也具有较高的碘值和亚甲兰值.IBAC的净化作用是以微生物的降解作用为主、活性炭的物理吸附和二者的协同作用为辅.     

工程菌产酶制备GABA测定条件的优化

基于Berthelot显色反应,采用正交设计法优化了测定大肠杆菌工程菌谷氨酸脱羧酶转化L-谷氨酸生成γ-氨基丁酸含量的条件.实验确定的最佳测定条件为:2.0mL 0.2mol/L pH6.0的醋酸缓冲液(内含0.1mmol/L的PLP,0.2mol/L的L-谷氨酸,稀释70倍),再依次加0.2mmol/L的硼酸缓冲液(pH9.0)1.0mL,0.5mL 6.0%重蒸苯酚和5.0mL 10%次氯酸钠,沸水浴加热10min后,迅速冰浴20min,待溶液出现蓝绿色后,加入60%(v/v)乙醇溶液4.0mL在640nm测定吸光值,绘制出标准曲线来计算GABA的含量.结果表明,该方法简便实用,相对误差小,适合实验室样品的快速检测.     

生物转化法重组谷氨酸脱羧酶合成γ-氨基丁酸

成功构建了一个高效表达大肠杆菌谷氨酸脱羧酶GAD来源的重组质粒pET28a-gadA,并转化E.coli BL21(DE3),工程菌株经0.4mmol/L IPTG或1g/L的乳糖, 37℃诱导表达8h,粗酶液的酶活达到12U/mL,大约是出发菌株E.coli K-12的60倍.工程菌1.15U粗酶液以31g/L L-谷氨酸钠为底物, 37℃、pH 4.0条件下反应4h,γ-氨基丁酸的生成量达到19.57g/L, L-谷氨酸钠的转化率为93%,从而为γ-氨基丁酸的生产提供了很好的前景.     

青蒿素合成生物学及代谢工程研究进展

青蒿素生物合成途径仅见于青蒿, 但其"上游"途径为真核生物所共有, 可望通过"下游"途径重建, 在真核微生物(如酵母)中全合成青蒿素. 过去10 年来, 青蒿素合成基因被国内外研究团队陆续克隆并导入酿酒酵母细胞, 已成功合成青蒿酸及双氢青蒿酸等青蒿素前体. 由于酵母缺乏适宜的细胞环境, 尚不能将青蒿素前体转变成青蒿素. 因此, 青蒿依然是青蒿素的唯一来源, 凸显出继续开展青蒿种质遗传改良的必要性. 我国科学家采用"开源"或"节流"等策略,已相继培育出多种转基因青蒿植株或品系, 为实现青蒿素的高产、稳产奠定了坚实的基础. 同时, 青蒿素生物合成的限速步骤尤其是终端反应机制已基本得到阐明, 有助于开展青蒿素形成与积累的环境模拟及仿生, 从而为彻底缓解青蒿素的供求矛盾创造先机. 本文最后讨论了产青蒿素前体微生物专利的作用及中国避免这些专利壁垒的方法.     

工程菌固定化生物滤池除臭效能影响研究

试验采用工程菌固定化生物过滤去除H2S和NH3。考察了最大容积负荷及其影响因素,并对相应的机理进行了分析。容积负荷不超过20 g.(m-3.h-1)时,工程菌固定化生物滤池对H2S和NH3的去除率均能达到99%以上,H2S和NH3容积负荷分别超过80 g.(m-3.h-1)和50 g.(m-3.h-1)或者停留时间小于20 s时,去除效率迅速降低。通过反冲洗可以降低滤池的压降,提高除臭效率,反冲洗后通气12 h和72 h,滤池对硫化氢和氨气的去除趋于稳定。     

重组人白细胞介素6工程菌的表达和功能初探

自人外周血的mRNA中获得了白细胞介素6(Interleukin-6, IL-6)cDNA,基因被克隆并在大肠杆菌中表达,在20L发酵罐中每L发酵液可得60g湿菌体,IL-6的表达量约占大肠杆菌全蛋白的30%以上,占包含体蛋白的60%。纯化产物在长期,急性毒性和三致实验正常的基础上,用恒河猴的功能实验表明,在不制造血象降低模型的情况下,仍能明显增加血液中血小板和白细胞的数量。